pACT-MyoD哺乳双杂交质粒

基本信息

启动子:	T7，CMV
复制子:	pUC ori,f1 ori
终止子:	SV40 poly(A) signal
质粒分类:	哺乳细胞，哺乳细胞双杂交载体
质粒大小:	7400bp
原核抗性:	Amp
克隆菌株:	DH5α
培养条件:	37℃，有氧 LB
表达宿主:	哺乳细胞
诱导方式:	无须诱导，瞬时表达
5'测序引物:	CMV-F：CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
3'测序引物:	根据序列设计引物

质粒简介

    The CheckMate™ Mammalian Two-Hybrid System provides positive control vectors that encode and express two proteins known to interact in vivo (13). MyoD is expressed in skeletal muscle and is a myogenic regulatory protein (14,15). The Id protein acts as a negative regulator of myogenic differentiation (16). MyoD and Id are members of the helix-loop-helix family of nuclear proteins. The pBIND-Id Control Vector contains a segment of murine Id cDNA (amino acids 29–148; 13,16) cloned in-frame with the GAL4 DNA-binding domain of the pBIND Vector . The pACT-MyoD Control Vector contains a segment of murine MyoD cDNA (amino acids 1–318; 13,15) cloned in-frame with the VP16 activation domain of the pACT Vector .

质粒图谱

pACT-MyoD哺乳双杂交质粒使用说明：
    
     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
     4、42℃热激90s，再冰浴2min；
     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
 
pACT-MyoD哺乳双杂交质粒注意事项：
 
      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。