- ¥1000
- 钦诚生物
- 上海
- QC5455
- 2025年07月16日
企业认证
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
5ug
基本信息
| 别名: | Plasmid #92054 |
|---|---|
| 原核抗性: | Kan |
| 克隆菌株: | 大肠杆菌DH5α |
| 培养条件: | LB/30℃ |
质粒图谱
pFREE-RK2基因编辑Cas9质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pFREE-RK2基因编辑Cas9质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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- 内容
- 询问日期
文献和实验诺奖得主 Science 发文：基因编辑诞生 10 年，未来将如何改变世界？
免疫通路的功能，用于预防病毒感染。（图 1A）随着研究的深入，科学家们揭示了 CRISPR 系统如何使用从序列转录的 RNA 分子阵列引导 Cas 蛋白切割，从而破坏病毒 DNA 或 RNA。 CRISPR-Cas9 基因编辑技术就是通过人工设计的 sgRNA（guide RNA）来识别目的基因组序列，并引导 Cas9 蛋白酶进行有效切割 DNA 双链，形成双链断裂，损伤后修复会造成基因敲除或敲入等，最终达到对基因组 DNA 进行修饰的目的。 图 1. 基于 CRISPR 的适应性免疫提供了可编
靶序列并进行 DNA 的裂解。CRISPR 的实际应用CRISPR 系统作为一种精确的基因编辑技术，主要被应用在 DNA 编辑领域，可为疾病的靶向个性化治疗提供强大的技术支持。例如，可在待敲除的目的基因的上下游各设计一条向导 RNA（gpRNA1、gpRNA2），将其与含有 Cas9 蛋白编码基因的质粒一同转入细胞中。则向导 RNA 可通过碱基互补配对靶向 PAM 附近的目标序列，Cas9 蛋白会使基因上下游的 DNA 断裂。而后细胞自身存在的 DNA 损伤修复的应答机制可使 dsDNA 断裂
最近 CRISPR/Cas9 基因敲除技术可谓风靡全世界的实验室，CRISPR 被称为规律成簇间隔短回文重复，其实际上就是一种基因编辑器，是细菌用以保护自身对抗病毒的一个系统。后来，研究人员发现，它似乎是一种精确的万能基因武器，可以用来删除、添加、激活或抑制其他生物体的目标基因。由于其相对于前几代基因敲除技术而言更为简便高效。所以一经问世便受到科研界的热捧。利用 Cas9 质粒建立 knock-out 细胞系实验过程主要有以下几步：1. 确定待敲除基因的靶位点；2. 设计识别靶位点识别的一对
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