- ¥1000
- 钦诚生物
- 上海
- QC1205
- 2025年07月14日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
5ug
基本信息
| 质粒分类: | 基因文库质粒;其它基因质粒;其它种源质粒 |
|---|---|
| 原核抗性: | 卡那霉素Kan（50μg/ml） |
| 克隆菌株: | DH5α等大肠杆菌 |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
| 备注: | 高拷贝质粒 |
质粒简介
pLAM12质粒的背景载体是pJL37载体，提供乙酰胺酶启动子（Acetamidase Promoter）
质粒图谱
pLAM12乙酰胺酶启动子质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pLAM12乙酰胺酶启动子质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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文献和实验后在培养基中加入PHA-L和PMA可以激活Jurkat细胞中CMV启动子，而单PMA就足以激活KG1和K562(人骨髓瘤白细胞)中的CMV启动子。SV40启动子的表达在含有大T抗原(存在于COS-1和COS-7)时会提高，因为大T抗原可以刺激染色体外的合成。 06DNA量 高质量的DNA对于进行高效的转染至关重要。转染的质粒一定纯度好、浓度高、无内毒素。浓度不要低于0.35ug/ul。产物表达，48小时mRNA表达最高；72h蛋白表达最高。 07瞬时/稳定转染表达 稳定基因表达符合长期生产需求
序列克隆入载体的RNA聚合酶III的启动子后,这样就能在体内表达所需的siRNA分子.这种方法总体的优点在于不需要直接操作RNA,能达到较长时间的基因沉默效果.通过质粒表达siRNAs大都是用Pol III启动子启动编码shRNA(small hairpin RNA)的序列.选用Pol III启动子的原因在于这个启动子总是在离启动子一个固定距离的位置开始转录合成RNA,遇到4—5个连续的U即终止,非常精确.当这种带有Pol III 启动子和shRNA模板序列的质粒转染哺乳动物细胞时,这种能表达siRNA
后 4 小时、8 小时、12 小时对细胞进行观察，若发现细胞状态变差，则需要立刻对细胞进行换液操作，使用新鲜的完全培养液替换病毒感染培养液 感染增强剂浓度过高，具有毒性作用 降低感染增强剂浓度，并考虑减少暴露时间 转染的基因对细胞有毒性 改进基因设计，使用不同的启动子或条件诱导型表达系统，避免毒性基因的持续过表达 细胞状态不佳或培养条件不适 确保细胞健康，优化细胞生长状态，选择对慢病毒耐受性好的细胞系 7、病毒感染后 qPCR 检测无过表达效果，可能
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