pCHO1.0哺乳抗体质粒

基本信息

启动子:	CMV/EF1
复制子:	ori
终止子:	SV40 poly(A) signal
质粒分类:	哺乳细胞，抗体表达载体
质粒大小:	12988bp
原核抗性:	卡那霉素Kan
筛选标记:	嘌呤霉素Puro
克隆菌株:	大肠杆菌DH5α
培养条件:	37℃，有氧，LB
表达宿主:	哺乳细胞
备注:	拷贝数较低，构建时需要大提质粒

质粒简介

        pCHO 1.0载体是由ProBioGen AG设计，能够表达一个基因或利用载体上面的杂交CMV启动子共表达2个目的基因。该载体包含有二氢叶酸还原酶（DHFR）选择性标记和嘌呤霉素（puromycin）抗性基因，可以同时使用MTX和嘌呤霉素进行筛选。

质粒图谱

pCHO1.0哺乳抗体质粒使用说明：
    
     1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
     2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
     3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
     4、42℃热激90s，再冰浴2min；
     5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
     6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
     7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
     8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
     9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
 
pCHO1.0哺乳抗体质粒注意事项：
 
      1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
      2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。