小鼠肿瘤坏死因子α Mouse TNF-αELISA KIT

小鼠肿瘤坏死因子α Mouse TNF-αELISA KIT（48T/96T）
TNF-α简介：
肿瘤坏死因子（TNF-α）是由单核细胞和巨噬细胞产生的多肽类细胞因子，在炎症反应、免疫系统的发展、细胞程序性死亡和脂代谢中起重要的作用。其功能主要是在免疫反应中是一个多功能的调节器甚至作为一个强烈的热原性物质刺激中性粒细胞，改变血管内皮细胞的特性，调节其它组织的代谢活性。TNF-α也可通过抑制脂蛋白脂肪酶的活性而导致恶液病。爱泼斯坦病毒引起的细胞活化也可被TNF-α所抑制。
巨噬细胞表面的淋巴因子和肉毒素也可介导包括上皮细胞、内皮细胞和肿瘤细胞等产生TNF-α。据报道干扰素能显著提高TNF-α的分泌量。
TNF-α在关节炎和其它组织的炎症的发病机理中起重要作用。TNF-α也参与了包括哮喘、克罗恩氏病、类风湿性关节炎、神经性疼痛、肥胖症、II型糖尿病、自身免疫病和肿瘤等疾病的发生。

检测原理:
本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠TNF-α的浓度。小鼠TNF-α捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的小鼠TNF-α会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠TNF-α抗体后，抗小鼠TNF-α抗体与小鼠TNF-α接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在TNF-α将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，小鼠TNF-α浓度与OD₄₅₀值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中TNF-α浓度。
结果判断:
1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。
2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。
典型数值和参考曲线

浓度pg/ml	典型OD值1	典型OD值2	OD平均值
0	0.1123	0.1279	0.1201
62.5	0.3321	0.3764	0.35425
125	0.4143	0.4545	0.4344
250	0.5423	0.5761	0.5592
500	0.9524	0.9803	0.96635
1000	1.4201	1.5021	1.4611
2000	2.1121	2.2231	2.1676

参考文献:
Vet Immunol Immunopathol. 1995 Aug;47(3-4):187-201.
Immunobiology. 1995 Jul;193(2-4):186-92.
Annu Rev Med. 1994;45:491-503.
Int J Cardiol. 1993 Dec 31;42(3):231-8.
J Periodontol. 1993 May;64(5 Suppl):445-9.

小鼠肿瘤坏死因子α Mouse TNF-αELISA KIT（48T/96T）
HAKATA ELISA试剂盒特点：

1、精选进口原材料,保证了抗体能够识别天然构象蛋白，从而保证检测准确性。

2、部分产品灵敏度较高。( 如人IL-1β ,因采用RND原料,标准曲线范围是0~250pg/ml ,其检测下限可达2.2 pg/m)。

3、检测抗体和链亲和素HRP酶均为工作液形式提供，直接使用，不用稀释。有效减少误差。

4、针对血清血浆样本,有专用研发的缓冲液,有效克服血清血浆中的干扰成分,有效避免计算结果"负值"
 

ELISA的基本原理是：

①使抗原（或抗体）结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；

 

②使抗原（或抗体）与某种酶联结成酶标 抗原（或抗体），而且此酶标抗原（或抗体）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；

 

③测定时将受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原（或 抗体）按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，最后结合 在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例；再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的 深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。

 

ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。但ELISA测定中影响因素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在中 除正常反应外，有时常可见到一些错误结果（即假阳性或假阴性结果）。引起ELISA测定错误结果的原因主要有：①标本因素；②试 剂因素；③操作因素。本文就标本因素对ELISA测定的影响做如下讨论。 血清是常用的ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源 性物质和外源性物质两种。

 

 

样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 

试剂盒性能

1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2. 灵敏度：zui低检测浓度小于1.0 pg/mL。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

6. 有效期：6个月
 

免责声明

1.  试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2.  严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担