- ￥555
- GeneCopoeia
- QP031
- 中国
- 2025年07月12日
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GeneCopoeia
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简介
GeneCopoeia推出的BlazeTaq™ SYBR® Green qPCR mix 2.0是采用SYBR Green 染料法进行real-time PCR反应的专用试剂，用于目标基因快速、准确的定量检测。它含有热启动抗体修饰的Taq DNA聚合酶和优化的缓冲液，可避免低温下靶DNA的非特异性扩增，提高了Mix的性能。本产品是一种即用型的5×预混液，使用时只需加入模板、引物、灭菌水，即可对模板DNA进行快速、特异性的定量分析。
BlazeTaq SYBR® Green qPCR mix 2.0采用了新型抗体修饰的BlazeTaq™热启动DNA聚合酶，室温时酶的活性被抗体完全封闭，更有效地抑制非特异性扩增；反应时只需95°C预变性30 s即可使酶完全被激活，可明显地缩短qPCR反应时间。此外，优化的Buffer体系显著提高Real Time PCR反应的灵敏度和重复性，同时具有扩增效率高、特异性强、检测范围广的特点，并能有效抑制引物二聚体的产生，使实验结果更加可靠。
本产品提供了一种通用的反应条件及实验操作流程，且推出带有、或不带有ROX参比染料的两个版本供用户选择，适用于大多数荧光定量 PCR 仪。
产品优势
- 灵敏度高：可检测低至5个拷贝数的DNA模板
- 特异性强：抗体修饰热启动DNA聚合酶，更有效抑制引物二聚体以及非特异性扩增的产生
- 扩增效率高：在宽广的GC含量范围内能维持高扩增效率
- 操作简单：预先配好的5×预混液，反应前只需加入模板、引物、灭菌水
- 适用性广：提供带有或不带有ROX的两个版本可选，适用于大多数荧光定量PCR仪
图1. 使用BlazeTaq™ SYBR® Green qPCR mix 2.0扩增8个10倍梯度稀释的双链DNA片段，DNA拷贝数范围为5×107~5个拷贝。如图所示，试剂盒显示出高灵敏度的特性，在宽广的定量范围内具有优异的线性相关性。
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竞品产品性能对比 使用Hela细胞系的梯度稀释的cDNA扩增B2M基因。BlazeTaq™（红色）与BioRad SsoAdvanced™UniversalSYBR®GreenSupermix（蓝色）的性能对比显示在相似扩增性能下，前者具有更强的信号。 |
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BlazeTaq™（红色）与Powerup™SYBR Green Master Mix（绿色）和Promega（蓝色）Gotaq®QPCR Master Mix（绿色）的性能对比显示，其灵敏度、扩增效率和特异性更高。 |
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Ct值比较。 使用BlazeTaq™（蓝色），Applied Biosystems的PowerUp™ SYBR Green Master Mix（橙色）和来自Promega的GoTaq®qPCRMaster Mix（灰色）扩增来自10 ng HeLa cDNA的41个基因。 |
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使用BlazeTaq™ SYBR® Green qPCR mix 2.0分别扩增50个和5个拷贝数的同一个DNA模板，并设无模板对照（NTC组），每组qPCR反应重复24次。结果显示，试剂盒对低浓度模板的扩增实验重复性好。 |
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使用BlazeTaq™ SYBR® Green qPCR mix 2.0分别扩增不同GC含量（GC含量范围在39.3~61.2%之间）的DNA模板。结果显示，各模板的扩增效率仍能维持在90%~110%之间，表明试剂盒对GC含量在一定范围内的DNA模板适用性广。 |
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- 作者
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文献和实验- Rongjun Zou, et al. 2024.The DNA-dependent protein kinase catalytic subunit exacerbates endotoxemia-induced myocardial microvascular injury by disrupting the MOTS-c/JNK pathway and inducing profilin-mediated lamellipodia degradation. Theranostics.DOI:10.7150/thno.92650[BlazeTaq™ SYBR® Green qPCR mix2.0, Cat. No.QP041]
- Yun Yuan, et al. 2024.VX-509 attenuates the stemness characteristics of colorectal cancer stem-like cells by regulating the epithelial-mesenchymal transition through Nodal/Smad2/3 signaling. World J Stem Cells.DOI:10.4252/wjsc.v16.i2.207[BlazeTaq™ SYBR® Green qPCR mix 2.0]
几个复孔，选择重复性好的 CT 值参与计算。 （2）CT＜30，重复性较差。这种情况一般同操作有关。 解决办法：从以下几个方面进行问题的排查：①加样准确度；②移液器吸取液体的准确度；③定期校准 qPCR 仪。 ①加样准确度 避免小体积加样，减少加样误差。可以将引物、SYBR Green Mix、ddH2O 配置成混合体系，并且增加模板的稀释梯度，大体积加样。如：原液 cDNA 添加 1μl，可以更改为原液 cDNA 稀释 5 倍，添加 5μl，使用 ddH2O 补齐体系至 20μl 即可
SYBR Green Quantitative PCR Protocol
12μl of master mix for each well, plus some excess1 Rxn: 10μl SYBR Green Mix 52 Rxn: 520μl SYBR 0.4μl Forward Primer (10μM stock) 20.8μl F
PCR产物的荧光值就可以。参比染料的作用是标准化荧光定量反应中的非PCR震荡，校正加样误差或者是孔与孔之间的误差，提供一个稳定的基线。现在很多公司已经把ROXTM配制在MasterMix或者Premixture里。如果反应曲线良好或已经优化好反应体系，也可以不加ROXTM染料校正。通常来讲，real-time qPCR的反应程序不需要像常规的PCR那样，要变性、退火、延伸3步。由于其产物长度在80-150bp 之间，所以只需要变性和退火就可以了。SYBR@Green等染料法，最好在PCR扩增程序结束
