RNA纯化试剂盒

特别提示：包括RNA纯化试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：RNA纯化试剂盒
英文名称：RNA Purification Kit
产品货号：WH0053
产品规格：20次

本试剂盒用于从酶反应液（如DNase处理、蛋白酶处理、RNA标记等）中纯化回收RNA，也可用于从其它方式提取获得的RNA的纯化。纯化的总RNA无蛋白质污染，所得的RNA可用于Northern Blot、Dot Blot、mRNA提取、cDNA合成、引物延伸、差异显示等。

本试剂盒使用独特的离心吸附柱，在高盐条件下RNA与硅胶吸附膜高效、专一地结合，同时zuì大限度除去蛋白质、无机盐离子和许多有机杂质等，在低盐条件下，RNA被洗脱。可处理的RNA样品量为20μg。

操作流程：


试剂盒组成：

组分	50T
溶液RK	10ml
漂洗液RW	12ml
RNase-Free ddH2O	15ml
RNase-Free吸附柱CR2（含2ml收集管)	20套
RNase-Free离心管（1.5ml)	20个

保存条件：室温（15-25℃)可保存1年。

预防RNase污染，应注意以下几方面：
1．经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2．使用RNase-Free的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3．RNA在本制品中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用RNase-Free的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4．配制溶液应使用RNase-Free ddH2O。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（V/V，放置过夜，高压灭菌）。

操作步骤：
第一次使用前在RK中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1ml RK中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液zuì好现用现配。配好的RK 4℃可放置一个月，溶液RK在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热溶解后使用。
第一次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。
以下步骤建议在冰浴中进行。

1．在RNA样品中加入RNase-Free水补足至100 μl，加入350 μl溶液RK（使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），充分混匀。
2．加入250 μl无水乙醇，充分混匀，立即进行下一步。
3．将上一步所得溶液和沉淀一起转入吸附柱CR2中，12000rpm离心30 sec，弃掉收集管中的废液。
4．向吸附柱CR2中加入500 μl漂洗液RW（请先检查是否已加入乙醇），室温放置2 min后，12000rpm离心30 sec，弃废液，将CR2放入收集管中。
5．重复操作步骤4。
6．12000rpm离心5 min，去除残余液体。
7．将吸附柱CR2转入一个新离心管中，加14-20 μl RNase-Free水，室温放置2 min后，12000rpm离心2 min。
  洗脱缓冲液体积不应少于14 μl，体积过小影响回收效率。
  洗脱液的pH对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率；且RNA产物应保存在-20℃，以防RNA降解。
8．要提高RNA得率，可重复上步操作一次，合并两次得到的溶液。

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