碱性磷酸酶（AP）标记的驴抗兔IgG

间接放射免疫法检测待测样品mTNF

抗TNF的抗血清（4）二抗：125I标记的驴抗兔IgG（5）未免疫兔血清（6）制备好的巨噬细胞悬液（细胞浓度为1×106ml）（7）96孔PVC板（聚本乙稀板）（8）γ-计数仪，温浴箱，刻度吸管，毛细吸管，加样器（头）三、操作步骤（1）将准备好的巨噬细胞悬液加入PVC板各孔中，0.1ml/孔，再用1%多聚甲醛固定于PVC板中，然后用PBS洗去多余的多聚甲醛；（2）设立不同倍比稀释度的TNF标准品；（3）加入3%BSA-PBS，每孔0.1ml， 37℃孵育1h，以封闭抗体非特异性结合位点；（3）加入3%BSA

抗体选择指南

物是为了检测抗体的结合，选择标记物依赖于几个参数：检测方法：荧光或着色沉淀，荧光标记物用特殊波长的光激发时发射出可见光，下表列出了几种荧光素的分子特征： 二抗连接标记酶HRP and AP 与其底物产生有颜色的沉淀物 封片介质（仅免疫组化），AEC、Fast Red、INT 或其它水性发光基团是可以醇溶的并要求水性封片。除上述之外的发光基团是有机的所以最好使用有机性封片介质。 荧光素标记物要求水性封片介质，藻红蛋白(藻青素 / 藻红素要求不添加

亲和素―生物素―过氧化物酶复合物法

pH值时，酶分子应稳定；(5)在酶标过程中，酶连接在抗体上，不影响两者的活性。符合上述要求的最为常用的酶是辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，AP)。HRP存在于植物辣根中，由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合成一种糖蛋白．分子量约40kD，稳定性好，其底物为过氧化物和供氢体，前者常用过氧化氢和过氧化氢尿素，后者常用二氨基联苯胺(diaminobenzidine，DAB)。DAB是无色还原型染料，能被氧化生成不溶