AO-EB双染色试剂盒

特别提示：包括AO-EB双染色试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：AO-EB双染色试剂盒
英文名称：Acridine Orange(AO)/EB Double Stain Kit
产品货号：QN2878
产品规格：50ml*2|250ml*2

ā啶橙能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，与双链DNA结合后发出绿色荧光，溴化乙锭(EB)仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。二者很容易判别。在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构。本产品AO、EB 溶液浓度分别为100ug/ml，所含稳定剂不影响实验效果。

使用方法：（仅供参考）
1、使用前先根据用量，将AO溶液和EB溶液按1:1混合成工作液，现用现配。
2.1、对于贴壁细胞或爬片，去掉培养基，用 PBS 洗两遍去除残余培养基和未贴壁细胞，加入新的 PBS；如果需要观察全部细胞特性，保留未贴壁细胞，可以直接在培养基中加入工作液。按照每毫升培养基或 PBS 中加入 20ul 工作液即可。室温放置 2-5min 后，用 PBS 洗 2 次，除去残余的荧光染料。加入新的 PBS 或培养基于荧光显微镜下观察即可。
2.2、对于悬浮细胞，可直接加入工作液或离心收集细胞后在 PBS 中加入工作液。按照每毫升培养基或 PBS 中加入 20ul 工作液即可。室温放置 2-5min 后，离心去除工作液，后用 PBS 洗 2 次，除去残余的荧光染料。加入新的 PBS 或培养基于荧光显微镜下观察即可。
3、建议用蓝光激发，视野下可以观察到死细胞呈现红色，活细胞呈现绿色。

注意事项：
1、含酚红培养基对观察有轻微影响。建议使用无酚红培养基。
2、染色液工作浓度和染色时间可根据具体实验情况适当调整，以期达到zuì佳效果。

保存：4℃避光密封保存，有效期一年。

除了AO-EB双染色试剂盒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：MTS细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
货号：BTN140634
规格：500次
MTS是一种新型甲臜化合物，和MTT同属四唑氮衍生物。MTS能被活细胞里的线粒体脱氢酶降解而产生棕黄色水溶性的甲臜，通过测定甲臜的光谱吸收，进而可以测定细胞的增殖情况。原理如下：


产品特点：
1．本试剂盒是单溶液式细胞增殖与细胞毒性检测试剂，主要成分包含MTS和一个电子耦合试剂，溶液的稳定性强，反应的灵敏度高。
2．操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时，无需洗涤或收获细胞，免去溶解步骤。
3．无放射性。不需要配制液闪混合物，也不需要处理废弃物。
4．与MTT相比，使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲臜产物。
5．操作灵活，与MTT不同，平板读数后可放回温箱继续孵育，使颜色进一步生成。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期半年。

使用效果：
96孔板中加入细胞100μL/孔(约1×104)，37℃，5% CO2细胞培养箱培养24小时，加入适当浓度的受试化合物。培养箱中孵育适当时间，每孔中加入10μL的MTS细胞增殖及毒性检测溶液。37℃孵育1-4小时。490nm波长检测光密度。

备忘录：
1．细胞的存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值(完全培养基加MTS细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞)或空白药物孔OD值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTS细胞增殖及毒性检测溶液，无细胞)，各重复孔的OD值取均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。
细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
2．求出T/C = 50%时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

名称：细胞周期检测试剂盒(微板比色法)
货号：SNM509
规格：100T|50T

名称：DNA银染试剂盒
货号：SNM515
规格：20T

名称：DNA ladder 5000
货号：SNM517
规格：60T

名称：线粒体蛋白提取试剂盒
货号：SNM525
规格：100T|50T

名称：Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒
货号：KFS187
规格：10T|20T|50T|100T
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V 进行荧光素PE 标记，以标记了的Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。

注意事项
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-PE 避光保存及使用。
3. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，不推荐用于检测组织样本。
4. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
5. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
6. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。

名称：广谱Caspase抑制剂(Z-VAD-FMK)(20mM)
货号：SY0484
规格：25μl
Z-VAD-FMK是一种细胞渗透性，不可逆的泛caspase抑制剂，能够抑制caspase家族蛋白酶活性和阻断凋亡发生。Jurkat细胞中Z-VAD-FMK抑制Fas诱导的凋亡，胸腺细胞和肝细胞内抑制各种刺激因子激发的凋亡活动。高浓度Z-VAD-FMK (> 100μM)改善TNFα诱导的嗜中性粒细胞凋亡，相反低浓度（(1-30 μM)完全阻止TNFα激活的凋亡发生。Z-VAD-FMK的促凋亡活性具有化合物特异性和ROS非依赖性的特点。Z-VAD-FMK 也具有体内活性。

不同于传统的Z-VAD-FMK，百奥莱博提供的多肽在天冬氨酸的P1位点进行了O-甲基化的修饰，使其稳定性和细胞渗透性都得以提高。一旦进入细胞，内源性酯酶水解甲基基团从而形成具生物活性的肽形式。

本品为溶于DMSO的储存液，浓度为20mM。

英文别名：Benzyloxycarbonyl-Val-Ala-Asp(OMe)-fluoromethylketone;
Z-VAD(OMe)-FMK,Z-Val-Ala-Asp(OMe)-FMK;
CAS：187389-52-2
分子式：C22H30FN3O7
分子量：467.49
外观：液体
纯度：>94%
储存条件：-20℃，有效期6个月
结构式


名称：台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒
货号：ZN1545
规格：100T
产品规格：100次
台盼蓝染色液(2×)10ml
细胞稀释液 100ml
产品保存：4℃保存，一年有效。
产品说明：
作为细胞染色剂之一的台盼蓝(Trypan Blue)已被证明受到活体细胞的排斥，而死亡细胞摄入染料显示蓝色。通过常用的光学显微镜可以观察到细胞染色情况，同时可以定量计数，但是该染色无法定性区别自杀细胞还是坏死细胞。台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒，是利用正常的健康细胞能够排斥台盼蓝，而丧失细胞膜完整性的细胞可以被台盼蓝染色。通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。
注意事项：
1.本产品为1000次操作
2.染色只需3-5分钟即可完成,操作简单
3.避免台盼蓝染色时间过长，否则由于其毒性导致细胞死亡
4.注意安全防护
使用方法：
1.收集细胞：
对于贴壁细胞,先用胰酶或EDTA消化下细胞,对于悬浮细胞，则可以直接收集细胞。把收集的细胞在1000-2000g离心1分钟，弃上清,估测细胞的量,适当的向沉淀中加入细胞稀释液，吹打重悬细胞。
2.台盼蓝染色：
吸取90μl细胞悬液到EP管内，加入10μl台盼蓝染色液(2X)，轻轻吹打混匀，染色 3-5分钟(染色时间不宜过长)。
3.细胞计数:
吸取适量加有台盼蓝染色液的细胞悬液，滴加血细胞计数板计数。于大方格内分别计数细胞总数和蓝染细胞数。
细胞存活率＝(细胞总数－蓝色细胞数)/细胞总数×100%。


名称：Annexin V-EGFP/7-AAD双染细胞凋亡检测试剂盒
货号：HR8281
规格：20T/50T/100T

名称：Caspase 1抑制剂
货号：HR0473
规格：200μl

名称：Caspase-8活性测定试剂盒
货号：QN2862
规格：20T|50T|100T
本试剂盒适用于检测哺乳动物组织、细胞Caspase-8活性。Caspase-8也称FLICE、MACH 或Mch5，通常以酶原的形式存在，凋亡时被激活，被认为是细胞凋亡转导过程的上游caspase。在Fas-receptor和TNFR-1介导的凋亡过程中Caspase-8被激活形成二聚体，进而激活下游Caspase-4,6,9,10。测定原理基于Caspase-8特异水解多肽底物IETD-pNA(Ile-Glu-Thr-Asp-p-nitroanilide)，释放的游离硝基*胺pNA在405nm有zuì大吸光度。采用可见光光度比色法测定pNA而得到Caspase活性。

试剂盒组成：

组分	规格(100T)	保存
裂解缓冲液	20ml	4℃
反应缓冲液	10 ml	4℃
2 mM IETD-pNA 底物	0.5 ml	-20℃，避光
10 mM pNA 标准品	0.2ml	-20℃，避光

储存条件：按标签标示分别保存试剂，有效期1年

所需仪器：可见光分光光度计配100μl 比色杯，或酶标仪。zuì佳波长405nm，也可测OD400～450nm但灵敏度略降。

操作步骤：

一、组织细胞准备：
Caspase活性测定值低，zuì常见原因是未发生凋亡或细胞量太少，其次是观测时间点不恰当。诱导凋亡时，并非剂量越大时间越长Caspase活性就越高。可设置不同剂量和时间点如0、2、4、8、16、24小时，以检测zuì佳的观察点。通常2×10⁷细胞或2mg组织裂解于1ml可产生1~3mg/ml蛋白。初次测定时，单个测定反应可加~200μg蛋白物对应于2×10⁶细胞或2个孔的6孔板细胞。zuì少，单个测定反应需加20μg蛋白对应于2×10⁵个细胞或2个孔的12孔板细胞。勿用丝氨酸蛋白酶抑制剂如E-64和leupeptin以免抑制Caspase活性。
1．裂解样本
  细胞裂解：1000g离心5分钟收集细胞，吸尽上清。每2～10×10⁶细胞加50～100μl裂解液震荡裂解，冰浴10分钟，再次震荡。
  组织裂解：3～10mg组织加100μl裂解液放入小型玻璃匀浆器，上下匀浆30次。转移匀浆液于离心管。
2．4℃条件下12000g离心10分钟，取上清测定，或-70℃保存。
3．蛋白定量：用Bradford法测定蛋白浓度。裂解液含还原剂不宜采用BCA法。应使蛋白浓度达到1～3mg/ml，相当于每10μl待测样品含10～30μg蛋白，否则应增加细胞用量。

二、测定pNA标准曲线：
1．用反应缓冲液稀释10mM pNA标准品为200、100、50、25、12.5、6.25、3.125μM。设置不加pNA的零管。
2．每一浓度取100μl加入96孔板或100μl比色杯，测定405nm吸光度OD值。
3．每一浓度标准管OD405值为x轴，对应的pNA浓度为y轴，用Excel制作pNA浓度对OD405值的标准曲线。

三、样品测定操作：
1．按下表设置96孔板反应体系。底物zuì后加入以使各管反应起始时间相同。设置不加样品的空白对照管。酶活力不足或过高，可增加或减少样品。
2．盖紧96孔板盖子并用封口膜密封。37℃反应2小时，肉眼可见颜色变黄时的OD405值约为0.2，此时即可测定。颜色变化不明显可延长反应或过夜，但酶活性较强时，孵育时间过长将导致反应失去线性关系。
3．样品管OD405减去空白对照OD405，为样品Caspase水解底物产生的pNA吸光度。根据标准曲线计算其含量，并以蛋白浓度校正之。
4．测得的Caspase酶活性表示方法有两种。
a、Caspase活性增加的百分比：100%×实验处理组OD/实验对照组OD，简单而可靠。
b、样品Caspase酶活力单位/mg protein，精确但计算较复杂，参见说明。
  反应体系参考表 (允许适当调整样品加样量)
  

	无样品空白对照	高酶活性样品	低酶活性样品
反应缓冲液(μl)	95	85	60
待测样品(μl)	-	10	35
底物(μl)	5	5	5
总体积(μl)	100	100	100

相关说明：
1．Caspase酶活力单位定义：当底物饱和时,一个Caspase酶活力单位定义为37℃ 1小时水解pNA底物，产生1nmol游离pNA。根据pNA标准曲线和样品OD值，可计算出Caspase酶活力单位。
2．除了处理组外，可设置阳性凋亡诱导剂组，阴性实验对照可包括不具有凋亡诱导作用的试剂(如果能得到)处理组、溶剂对照组、或凋亡诱导零时间点。