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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
49
- 英文名：
EHA105 农杆菌感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
10×100μL
EHA105 农杆菌感受态细胞10×100μL规格详细介绍：
公司的RNA/DNA提取目录有下面10个系列，5000余种产品
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
以下是EHA105 农杆菌感受态细胞10×100μL规格的相关产品：
RIPA 裂解液 ( 弱 )100mL Sodium orthovanadate( 磷酸酯酶抑制剂 )2g
NP-40 裂解液100mL Sodium Butyrate(HDAC 抑制剂 )1g
动植物总蛋白微量提取试剂盒50 次 SOD( 抗氧化酶 )65KU
动植物膜蛋白微量制备试剂盒50 次 SNP(NO 供体 )1g
动物细胞核蛋白微量制备试剂盒25 次 SMT(iNOS 抑制剂 )100mg
三合一 RNA 上样液 ( 无 EB) 1.5mL 少突胶质前体细胞生长因子5mL
DNA 碱性胶上样液 ,6×1.5mL 上皮细胞生长因子5mL
DNA 碱性胶上样液 ,6×10mL 上皮细胞生长因子 -25mL
miRNA 尿素 -PAGE 上样液 ,6×1.5mL 三合一 RNA 上样液 ( 无 EB) 1.5mL
miRNA 尿素 -PAGE 上样液 ,6×10mL 三合一 RNA 上样液 ( 含 EB) 1.5mL
少突胶质前体细胞生长因子5mL DNA 粘转平试剂盒20 次
少突胶质细胞生长因子5mL DNA 修复混合液 30 次
神经元生长因子5mL DNA 修复混合液 150 次
肾系膜细胞生长因子5mL DNA 稀释液10mL
髓核细胞生长因子5mL DNA 探针变性液10mL
变形杆菌 师岗链霉菌
表皮葡萄球菌冻干粉 Methylophagamurata 模式菌株
掘氏疫霉 伴放线放线杆菌 血清B型
苏云金芽胞杆菌蜡螟亚种 Bacillus thuringiensis subsp. galleriae 类干酪乳杆菌类干酪亚种 模式菌株
阿达青霉 长野解普鲁兰杆菌
多粘芽孢杆菌 变形杆菌
蜡状芽孢杆菌蕈状变种 斯氏梭菌
牙龈卟啉单胞菌 黄色长孢链霉菌
缺陷假单胞菌ATCC19146冻干粉 奇异变形杆菌冻干粉
扁柄侧耳 单增李斯特菌
EHA105 农杆菌感受态细胞10×100μL规格黑曲霉菌冻干粉 新月弯孢霉
类芽孢杆菌 谷氨酸棒状杆菌(黄色短杆菌)
阴沟肠杆菌（阴沟肠杆菌阴沟亚种） 硫乙醇酸盐平板培养基70mm
大秃马勃 金黄色葡萄球菌金黄色亚种
糖化酵母 弗氏柠檬酸杆菌
操作步骤:
1. EHA105 农杆菌感受态细胞10×100μL规格匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
实验要点：
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的（—氯仿—=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要
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文献和实验20min。4℃5000rpm离心5min，去上清。1.1.6. 加入4ml预冷的含15%甘油的0.1M的CaCl2溶液，轻轻悬浮。1.1.7. 农杆菌悬浮液分装于无菌Eppendorf管中，每管200μl冻存于-70℃。1.2. 双元载体转化农杆菌EHA105取1μg左右的质粒DNA加入到200ml EHA105感受态细胞中，混匀后，冰浴30min，-70℃放置10min 。再在37℃水浴5min或42℃水浴1min，接着冰浴2min，加入800mlYM液体培养基28℃，175rpm摇培3hr
，轻轻悬浮细胞，冰上放置20min。4℃5000rpm离心5min，去上清。 1.1.6. 加入4ml预冷的含15%甘油的0.1M的CaCl2溶液，轻轻悬浮。 1.1.7. 农杆菌悬浮液分装于无菌Eppendorf管中，每管200μl冻存于-70℃。 1.2. 双元载体转化农杆菌EHA105 取1μg左右的质粒DNA加入到200ml EHA105感受态细胞中，混匀后，冰浴30min，-70℃放置10min 。再在37℃水浴5min或42℃水浴1min，接着冰浴2min，加入800mlYM
埃希菌？（ Eco ） ATCC25922 、标准产酶 Eco （ TEM-26 ）作对照。 3． PCR 产物的纯化、克隆：按照 PCR 产物纯化 kit （ QIAgen ）的要求，纯化目的片断，取 3μl 与 pGEM-Teasy Vector(Promega) 连接。连接反应液转化至 EcoDH 5a 感受态细胞，经含氨苄西林（ Amp50μg/ml ）的麦康凯培养基筛选。挑取白色菌落，接种于含 Amp 的 LB 培养液中， 37 ℃ 培养过夜。经 EcoRI （ Takara
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