BL21 感受态细胞0.1 mL×10说明书

实验步骤：
(1) BL21 感受态细胞0.1 mL×10说明书实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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储存事项:
A. BL21 感受态细胞0.1 mL×10说明书在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. BL21 感受态细胞0.1 mL×10说明书组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
LPS(TLR4 激活剂 )0.5mg  ATP 溶液，100mM0.25mL
LY294002(PI3K 抑制剂 )1mg  APMSF 溶液，10mg/mL1mL
Metformin(LKB1-AMPK 激活剂 )1g  AP 标记的抗生物素抗体10μL
MG-132(Proteasome 抑制剂 )1mg  AMV cDNA 第一链合成试剂盒30 次
Monensin ( 蛋白转运抑制剂 )100mg  Aminoally-dUTP 溶液，10mM100μL
大提柱式质粒 DNAout 10 次  微型离心管专用研磨杵 ( 无离心管 ) 50 只
大提无内毒素质粒 DNAout5次  微量双链 DNA 定量试剂盒1mL
大提无内毒素质粒 DNAout10 次  微量核酸提取试剂盒50 次
96 孔板质粒 DNAout( 离心法 )1次  微量核酸提取试剂盒200 次
96 孔板质粒 DNAout( 真空法 )1次  微量核酸沉淀剂10mL
兔抗 GST 标签多抗20μL  RNA 级 Tris Base( 三羟甲基氨基 )100g
HRP 标记的兔抗 GST 标签多抗20μL  RNA 级 SDS( 十二烷基硫酸 )100g
一站式 MBP 标签蛋白纯化套装20 次  RNA 级 Sarkosyl( 月桂酰 -N- 甲基氨基乙酸 ) 100g
小鼠抗 His 标签单抗100μL  RNA 级 PVP K30( 聚乙烯基烷酮 K30) 100g
小鼠抗 His 标签单抗1000μL  RNA 级 Oligo(dT) 纤维素25mg
鲍曼不动杆菌   伴放线放线杆菌
罗斯酵母   黄色短杆菌
紫红曲霉   伯顿毕赤酵母
白色念珠菌冻干粉   顶头孢霉
发根根瘤菌   棉花立枯菌
短短芽孢杆菌   嗜盐四联球菌  在酱油酿造中发挥重要作用和增加特有风味
甲型副伤寒沙门菌CMCC50001冻干粉南京便诊   长赤细菌
苏云金芽孢杆菌   微黄八叠球菌
清酒乳杆菌清酒亚种   地霉属
银白杨盘长孢   寄生曲霉
BL21 感受态细胞0.1 mL×10说明书河流弧菌   反曲毛壳
玫瑰红表面培养基60mm/25cm2   蜡蚧轮枝孢菌
丁醇梭菌丁醇杆菌)   固囊酵母
蜡蚧轮枝孢菌   灰葡萄孢
嗜热乳酸链球菌   金黄色葡萄球菌金黄亚种
服务流程：
1）BL21 感受态细胞0.1 mL×10说明书客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日