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- 2025年07月06日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
28
- 英文名：
即用型蓝白 T 载体 A 型 (T7-SP6，有 MCS)
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
20 次
(1) 即用型蓝白 T 载体 A 型 (T7-SP6，有 MCS)20 次说明书实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
以下是即用型蓝白 T 载体 A 型 (T7-SP6，有 MCS)20 次说明书的详细介绍点击了解更多“克必隆”克隆及表达产品：
储存事项:
A. 即用型蓝白 T 载体 A 型 (T7-SP6，有 MCS)20 次说明书在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. 即用型蓝白 T 载体 A 型 (T7-SP6，有 MCS)20 次说明书组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
96 孔板血液 DNAout( 真空法 )1次 一站式 RNA 电泳套装10 次
96 孔板血液 DNAout( 真空法 )5次 一站式 miRNA 尿素 -PAGE 电泳套装30 次
96 孔板血液 DNAout( 离心法 )1次 一站式 MBP 标签蛋白纯化套装20 次
凝固血液 DNAout30 次 一站式 His 标记蛋白质微量纯化套装20 次
凝固血液 DNAout100 次 一站式 His 标记蛋白质微量纯化套装20 次
大提柱式真菌 RNAout5次 柱式鼠尾 DNAout50 次
细菌 RNAout100 次 柱式拭子 DNAout50 次
细菌 RNAout250 次 柱式石蜡包埋组织 DNAout30 次
葡萄球菌 RNAout50 次 柱式石蜡包埋组织 DNAout2.0（二代测序专用）50 次
分枝杆菌 RNAout50 次 柱式软体动物 DNAout50 次
柱式微生物基因组 DNAout 50 次 线状 DNA 清除剂30 次
一管式病毒 DNAout50 次 显影粉1袋
一管式病毒 DNAout200 次 显影定影套装1套
M13 噬菌体单链基因组 DNAout50 次 先锋霉素溶液 ,100mg/mL1mL
λ 噬菌体 DNAout50 次 细菌总蛋白质微量提取试剂盒30 次
Hyphomonasadhaerens 淡紫青霉
粗壮假丝酵母 红色红曲霉
白球拟酵母 梨形毛霉
荚膜红细菌 乳链球菌
产色链霉菌 尿素八叠球菌
大肠埃希菌CMCC44102冻干粉 粪肠球菌ATCC51299冻干粉
粘红酵母 玫瑰褐链霉菌
米氏硫胺素芽孢杆菌 青枯假单胞菌
泡盛曲霉烟色变种 米根霉 糖化菌
宋内志贺菌冻干粉 米根霉 糖化菌；产乳酸
即用型蓝白 T 载体 A 型 (T7-SP6，有 MCS)20 次说明书福氏志贺氏菌 威尔酵母
施氏假单胞菌 叶柄粘球菌
苜蓿根瘤菌 热带念珠菌ATCC750冻干粉
裂褶菌 泡盛曲霉
新月弯孢霉 水螺菌
服务流程：
1）即用型蓝白 T 载体 A 型 (T7-SP6，有 MCS)20 次说明书客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
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文献和实验按照TaKaRa的说明书，我用了Cool Start法，就是所有操作和试剂都是放在冰上进行的，据说能够减少非特异性。我当时担心目的基因量不够，所以P了两管，分到四个孔跑胶回收的。胶回收用的是OMEGA的试剂盒。 切胶回收之后测得目的片段浓度大概为20 ng/ul。按照TaKaRa的pMD18T说明书的要求，pMD18T需要加入1 ul，而目的片段需要0.1 pmol-0.3 pmol，换算一下，需要的目的片段的量大概为0.1*1800*325=58500 pg=58.5 ng到0.3*1800
序列的配合基被纯化和组装，即可用多肽或蛋白库与之反应(通常在柱子或96孔板上进行)，检测其结合情况。“捕获”的完整噬菌体经洗提、扩增，再经2至3次这样的富集，即可在很短的时间内一次完成药物或纯化的受体与为数众多的多肽或蛋白的结合分析。采用这种方法进行配合基(如信号转导中间体区域)结合区作图也是可行的。 cDNA在lambda载体表达与T7Select亲和淘洗有什么不同？ 确切地说，亲和淘洗是一种选择方法，而非仅仅只是一种筛选方法。亲和淘洗可以直接发现和“捕获”表达目的多肽或蛋白的噬菌体，这种富集
有一个配制方法可以参考： 【X-gal溶液配制方法】X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。 也就是每1ML中称取20MG就行 蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法，是根据载体
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