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外泌体示踪
Exosome（外泌体）是由活细胞分泌小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；参与细胞之间的交流，物质的运输以及正常生理过程的维持，此外还与疾病的产生有关。对分离的外泌体进行体外标记或活体示踪，有助于对外泌体的功能进行进一步的研究。目前对于外泌体的标记方法有很多种，包括亲脂性的染料和膜渗透型的化合物等。
本司可以提供外泌体染色服务，包括亲脂性染料：PKH-67（green）/PKH-26（red），染料可以稳定的与细胞膜脂质区结合并发出荧光，主要用于细胞体外标记、体外细胞增殖研究以及体内外的细胞失踪研究。PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更长的半衰期，标记在兔红细胞上的PKH26半衰期长达100天以上。特别适用于体外增殖研究以及长期的体内细胞跟踪研究。
为了观察外泌体与细胞的融合情况，可以对外泌体进行PKH67标记并与靶细胞共培养，通过共聚焦观察细胞对外泌体的摄取行为
二、实验内容：
1. 细胞爬片
2. 外泌体染色
3. 标记后的外泌体与目的细胞共培养
4. 共聚焦拍照
三、实验说明及结果
1. 客户提供：外泌体和目的细胞（如客户无法提供，也可由我司提取外泌体或提供细胞）
2. 公司提供：实验步骤、实验报告及图片
3. 实验周期：4-5周（根据目的细胞情况而定）
四、实验结果展示
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文献和实验[1]Yan Y, Wang P, Tang X, Wang Y, Xiao M, Liu Z, Tu X, Li X. Engineered Dll4-overexpressing osteocyte-derived exosomes enhanced bone regeneration by regulating osteogenesis and angiogenesis. Theranostics. 2026 Jan 1;16(6):2780-2797. doi: 10.7150/thno.121905. PMID: 41510168; PMCID: PMC12775673.
[2]Cao L, Sun K, Zeng R, Yang H. Adipose-derived stem cell exosomal miR-21-5p enhances angiogenesis in endothelial progenitor cells to promote bone repair via the NOTCH1/DLL4/VEGFA signaling pathway. J Transl Med. 2024 Nov 8;22(1):1009. doi: 10.1186/s12967-024-05806-3. PMID: 39516839; PMCID: PMC11549876.
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[5]Wu B, Feng J, Wang X, Guo J, Sheng L, Wang J, Xu J, Zhou J, Wang G, Wen Y, Liu J, Zhao S, Yang D, Jin Y, Fu Q, Xu J. miR-19b-3p engineered adipose-derived stem cell exosomes attenuate acute liver failure via promoting tissue repair and microenvironment remodeling. Mater Today Bio. 2025 Dec 19;36:102697. doi: 10.1016/j.mtbio.2025.102697. PMID: 41560812; PMCID: PMC12813244.
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的数据来看蛋白浓度较高，但是 WB 结果说明了它的蛋白浓度并非真正的外泌体蛋白，含有很多杂质蛋白。 （三）实验结论分享 通过本次对超离法和试剂盒法效果的比较，可以发现，超离法经过多次离心步骤，可以获得纯度较高的外泌体，但是也会有一定的外泌体损失。试剂盒法虽然得到较多的外泌体，但是也有很多杂质混在一起。每种方法都有利弊，可以根据自己的需求选择合适的方法。 建议：如果做外泌体示踪、细胞功能学或动物实验，尽量选择用超离法做，一方面这类实验外泌体需求量比较
主要分为两大类，第一类是 PKH67（绿色荧光）/PKH26（红色荧光），由于它们可以与外泌体的脂质双层膜稳定结合，所以染色效果较好，应用较广泛。 图1 PKH67 标记的外泌体与神经元之间相互作用 Acta Neuropathol Commun. 2018 Feb 15;6(1):10. 图2 PKH26 标记的外泌体与 MDA‐MB‐231 细胞共培养 Cancer Sci. 2019 Oct;110(10):3173-3182. 第二类是 Di 系列的亲脂性染料，包括DiI（橙色荧
液，用 PBS 清洗细胞 3 次 使用 4% 多聚甲醛在室温下固定 15 min 后观察细胞形态 弃去 4% 多聚甲醛，用 PBS 清洗细胞 3 次，每次 5 min （不透化）加入 1% Triton X-100 透化 5 min 后用 PBS 清洗细胞 3 次 配制所需染色工作液体积 加入 300μL 色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞 37℃ 避光孵育细胞 30 min。 吸除染色工作液，再用 PBS 洗涤 3 次，每次 5 min 取出细胞爬片，用含 DAPI 封片剂进行封片 激光
