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- 2025年12月31日
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外泌体示踪
Exosome（外泌体）是由活细胞分泌小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；参与细胞之间的交流，物质的运输以及正常生理过程的维持，此外还与疾病的产生有关。对分离的外泌体进行体外标记或活体示踪，有助于对外泌体的功能进行进一步的研究。目前对于外泌体的标记方法有很多种，包括亲脂性的染料和膜渗透型的化合物等。
本司可以提供外泌体染色服务，包括亲脂性染料：PKH-67（green）/PKH-26（red），染料可以稳定的与细胞膜脂质区结合并发出荧光，主要用于细胞体外标记、体外细胞增殖研究以及体内外的细胞失踪研究。PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更长的半衰期，标记在兔红细胞上的PKH26半衰期长达100天以上。特别适用于体外增殖研究以及长期的体内细胞跟踪研究。
为了观察外泌体与细胞的融合情况，可以对外泌体进行PKH67标记并与靶细胞共培养，通过共聚焦观察细胞对外泌体的摄取行为
二、实验内容：
1. 细胞爬片
2. 外泌体染色
3. 标记后的外泌体与目的细胞共培养
4. 共聚焦拍照
三、实验说明及结果
1. 客户提供：外泌体和目的细胞（如客户无法提供，也可由我司提取外泌体或提供细胞）
2. 公司提供：实验步骤、实验报告及图片
3. 实验周期：4-5周（根据目的细胞情况而定）
四、实验结果展示
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文献和实验的数据来看蛋白浓度较高，但是 WB 结果说明了它的蛋白浓度并非真正的外泌体蛋白，含有很多杂质蛋白。 （三）实验结论分享 通过本次对超离法和试剂盒法效果的比较，可以发现，超离法经过多次离心步骤，可以获得纯度较高的外泌体，但是也会有一定的外泌体损失。试剂盒法虽然得到较多的外泌体，但是也有很多杂质混在一起。每种方法都有利弊，可以根据自己的需求选择合适的方法。 建议：如果做外泌体示踪、细胞功能学或动物实验，尽量选择用超离法做，一方面这类实验外泌体需求量比较
主要分为两大类，第一类是 PKH67（绿色荧光）/PKH26（红色荧光），由于它们可以与外泌体的脂质双层膜稳定结合，所以染色效果较好，应用较广泛。 图1 PKH67 标记的外泌体与神经元之间相互作用 Acta Neuropathol Commun. 2018 Feb 15;6(1):10. 图2 PKH26 标记的外泌体与 MDA‐MB‐231 细胞共培养 Cancer Sci. 2019 Oct;110(10):3173-3182. 第二类是 Di 系列的亲脂性染料，包括DiI（橙色荧
到大量纳米颗粒，可能是胶束和聚集体，颗粒分布在80-400 nm，与外泌体所在的粒径区间（30-150 nm）存在交集，这与之前报告的结果一致[2, 3]。PKH聚集而成的纳米颗粒自身的荧光干扰不容忽视，Lai 等人[4]研究表明用 PKH67 染色（没有 EV）甚至比 PKH67 染色的 EV 具有更强的荧光信号，这些同样具有荧光的纳米颗粒会“伪装”成外泌体，影响标记阳性率、外泌体粒径分布和细胞摄取结果。 Fig.1 NTA视频观察到大量聚集的PKH颗粒 2. 弥散造成的假阳
