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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 亚型:
IgG
- 形态:
液态或冻干粉
- 保存条件:
低温
- 标记物:
FITC标记抗体
- 供应商:
圻明生物
- 浓度:
1mg/ml
- 抗体英文名:
Anti-IFN gamma/FITC
规格:100ul
浓度:1mg/ml
研究领域:免疫学 神经生物学 激酶和磷酸酶 表观遗传学
抗体来源:Rabbit
克隆类型:Polyclonal
交叉反应:Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep,
相关标记抗体:辣根过氧化物酶标记抗体,生物素标记抗体,胶体金标记抗体,红色罗丹明(RBITC)标记抗体,橙黄色PE标记抗体,绿色荧光素(FITC)标记抗体等。
圻明生物公司所售产品仅供科研试验。
FITC标记的干扰素-γ/IFN-γ抗体用于标记的抗体,要求是高特异性和高亲和力的。所用抗血清中不应含有针对标本中正常组织的抗体。一般需经纯化提取IgG后再作标记。
作为标记的荧光素应符合以下要求:
①应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团,与蛋白质结合后不易解离,而未结合的色素及其降解产物易于清除。
②荧光效率高,与蛋白质结合后,仍能保持较高的荧光效率。
③荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明。
④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质。
⑤标记方法简单、安全无毒。
⑥与蛋白质的结合物稳定,易于保存。
生长因子和激素(Growth Factor and Hormones) 血管内皮细胞生长因子(VEGF)是一种特异作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子,它能引起血管通透性增加,引起细胞外基质成分改变,诱导血管形成。在炎症、创伤愈合、心脏缺血、动脉粥样硬化、糖尿病性视网膜病变及肿瘤形成等与血管生成和病变有关的诸多病理过程中起重要作用,VEGF与血管生成有关,从而也与肿瘤生长也有很大关系,近年来受到很多关注。
FITC标记的干扰素-γ/IFN-γ抗体免疫印迹操作-转膜
1).将凝胶玻璃板置于盛有电泳转移缓冲液的容器中,浸泡15 20min.。
2).带上手套,裁剪好滤纸(Whatman, 3MM CHR)和电转膜,滤纸和膜大小为83mmX 75mm,尽量避免污染滤纸和膜,将裁减好的滤纸和膜浸泡与电泳转移缓冲液中,驱除留于膜上的气泡。
3).打开转移盒并放置浅盘中,用转移缓冲液将海绵垫完全浸透后将其放在转移盒壁上,海绵上再放置- -张浸湿的 Whatman, 3MM滤纸。
4).小心将凝胶放置于滤纸上,避免气泡(用转移缓冲液润湿并戴手套以转移缓冲液润湿胶面,小心将电转膜放在胶面上,从凝胶的一边开始轻轻放下可避免气泡,注意- -定要戴手套或镊子接触膜)。
5).用去离子水清洗缓冲液槽,在缓冲液槽中放入搅拌子,将另一块海绵用转移缓冲液浸透后放在凝胶膜“三明治”上,关上转移盒并插入转移槽。
6).将冰盒装入缓冲液槽,注满4'C预冷的转移缓冲液。
7).将整个装置放在磁力搅拌器上并开始搅拌,连接好转移电极恒流300mA转移70min。
8).电转完毕后,将电转膜置于5%的脱脂奶粉(PBS 配制)中封闭,37*C2 小时或4C过夜。
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文献和实验多色流式实验中,由于不同荧光素的发射波长的覆盖范围不同,可能产生重叠,对实验结果的数据分析造成一定干扰,我们通常会设置单阳管进行调节补偿。同时,单阳管还可以辅助我们调节通道电压,防止信号超出接收范围。 图示:常见荧光素的发射光谱 A. 如何设置单阳管 单阳管即单染管,是只添加一种荧光抗体的样本管。一般来说,实验 panel 有几种荧光,就需要设置几个单阳管。如:APC、PE、FITC 的三色 panel,需要设置三个单阳管。 B. 制备单阳管的要求 ①单阳管和全染管的样本类型、荧光素要保持
分泌。 随后进行表面染色:先以Fc阻断剂(2.4G2克隆,5 μg/mL)处理10分钟,再于4°C避光孵育15分钟,使用含1% BSA和0.1% NaN₃的DPBS缓冲液配制抗体,常用组合包括CD90.2、CD4、CD8、CD25、CD11b和CD45.2等标记。 固定步骤采用2%甲醛(FA,由含<3%甲醇的4% Roti-Histofix稀释),室温孵育40–60分钟。破膜与胞内染色使用0.1%皂苷缓冲液或1×Perm缓冲液,加入抗FoxP3、T-bet、RORγt、IL-17A或IFN-γ等抗体,4°C
(内部复杂度),不同细胞群因物理特性差异呈现特定分布,如淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞各居不同区域,为精准设门提供依据。 对照组:圈门的“标尺” 设置合理对照是流式设门的关键,确保数据准确。同型对照与检测抗体在种属、亚型、荧光标记等完全一致,但不结合目标抗原,用于识别Fc受体介导的非特异性结合,排除背景干扰。阴性对照则用于确定荧光阳性阈值,区分真实信号与背景噪声。二者共同作为设门的参照标准,缺失将导致误判,严重影响分析可靠性。 核心圈门步骤 1、剔除
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