2×快速高保真PCR预混反应液

特别提示：包括2×快速高保真PCR预混反应液在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×快速高保真PCR预混反应液
英文名称：2×Super HiFi PCR MasterMix
产品货号：WH0091
产品规格：50μl×40次（不含染料)|50μl×200次（不含染料)|50μl×40次（含染料)|50μl×200次（含染料)

本制品为Super HiFi DNA Polymerase的预混Mix形式。Super HiFi DNA Polymerase是通过定向分子进化技术开发得到的新型快速高保真DNA聚合酶，对DNA模板具有超强的亲和力，从而使得聚合酶的延伸速度可达15~30 sec/kb、模板延伸能力可达15kb，并能提高PCR反应的成功率、增加PCR扩增的产物量。此外，Super HiFi DNA Polymerase具有超强的3"~5"外切酶活性（Proofreading活性），保真性约为普通Taq DNA Polymerase的50倍。

本制品为一管式预混Mix形式，内含Super HiFi DNA Polymerase、超纯dNTP、MgCl2、反应缓冲液等PCR反应所需组分，只需加入模板和引物即可进行PCR扩增反应。除此之外，预混Mix中还整合了PCR反应增强系统，不但提高了预混Mix的稳定性，使得聚合酶对PCR反应抑制剂的耐受能力增强，还提高了Super HiFi DNA Polymerase对高GC含量模板的扩增能力，可扩增GC含量高达75%的模板。

本制品的PCR产物为平末端，可加A处理再与T载体连接或直接使用平末端克隆载体进行基因克隆，如我公司零背景快速连接试剂盒（目录号：WH0191）。

产品特点：
·扩增快速：延伸速度可达15~30 sec/kb。
·保真性高：保真性为普通Taq DNA Polymerase的50倍。
·延伸力强：可扩增长至15 kb的DNA片段。
·灵敏度高：模板用量可低至10pg。
·复杂模板：可成功扩增GC含量高达75%的DNA模板。
·操作简便：预混Mix形式，只需加入模板和引物即可进行PCR反应。

下游应用：
DNA的高保真快速扩增，如长片段扩增、高GC含量模板、复杂模板扩增等，基因定点突变、基因组点突变的分析（SNP）等。

扩增模板类型及长片段扩增举例：

模板类型	有记录的长片段扩增
人基因组DNA	~8kb
大鼠基因组DNA	~8kb
水稻基因组DNA	~8kb
小麦基因组DNA	~8kb
玉米基因组DNA	~8kb
大肠杆菌基因组DNA	~8kb
cDNA	~6kb
λDNA	~15kb

质量控制：
经检测无外源核酸酶活性；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。

产品组成：

组成	50μl×40rxn	50μl×200rxn	50μl×40rxn	50μl×200rxn
2×Super HiFi PCR MasterMix	1ml	5×1ml	1ml	5×1ml
ddH2O	1ml	5ml	1ml	5ml
Loading dye in mix	Yes	Yes	No	No

储存条件:-20℃可保存1年


高PCR扩增成功率：对于不同物种来源的基因组DNA模板、高GC含量的复杂DNA模板、长片段模板等均有较高的扩增效率及成功率。
1：长度1kb；
2：长度2kb；
3：长度4kb；
5：长度8kb；
6：长度10kb；
7：长度15kb；
8：GC含量62%（长度1.5kb)；
9：GC含量75%（长度2kb)；
10：长度2.2kb；
11：长度8kb；
12：长度2.1kb；
13：长度8kb。

操作步骤：
一、PCR反应液的配制：
1．室温融化2×Super HiFi PCR MasterMix，并按下表配置PCR反应体系。
  注：反应体系配制过程应在冰上进行，所有的试剂在使用前均要充分混匀。

组分	体积
DNA Template	**
Primer1*（10μM）	1.25μl
Primer2*（10μM）	1.25μl
2×Super HiFi PCR MasterMix	25.0μl
ddH2O	至50μl

*引物终浓度为0.25μM时可以在大多数体系中获得良好的扩增结果。扩增效率不高时，可增加PCR反应体系中的引物浓度；适当减少PCR反应体系中的引物浓度则可以增加PCR反应特异性。如有必要，可以在0.2~1.0 μM间进行优化选择。
**模板DNA用量请参照如下（50μl PCR反应体系)：

模板类型	模板用量范围	推荐模板用量
基因组DNA	1~1000ng	100~500ng
质粒DNA	0.01~100ng	1~10ng
cDNA	1~200ng	50~100ng
λDNA	0.01~100ng	1~10ng

2．按1中建议模板及引物用量加入模板、引物和ddH2O，混匀后上机进行PCR反应。
二、PCR反应条件：
1．使用2×Super HiFi PCR MasterMix进行扩增反应时，请先使用三步法。
  注：进行三步法扩增时，按延伸速度按照15~30sec/kb进行设定。对于DNA长度≥6 kb的模板或复杂模板，建议将延伸时间延长至30~60 sec/kb。下述反应程序仅供参考，实际情况下，客户可按照自身情况进行更改和调整。

退火温度为60℃可以在大多数体系中获得良好的扩增结果。PCR反应特异性不高时，可以在55~68℃范围内适当增加退火温度；如果引物Tm值小于63℃，可以将退火温度按Tm值进行设定。
2．当扩增产物出现杂带或弥散时，请尝试两步法或降落PCR（Step down PCR）。

3．结果检测：反应结束后取5 μl反应产物，进行琼脂糖凝胶电泳检测。

常见问题分析：

出现问题	可能原因	解决办法
无扩增产 物或扩增 产物很少	循环条件 不合适	将延伸时间延长为1min/kb
		增加2~5个循环
		使用Step down PCR（针对 6kb以上扩增片段效果明显)
	模板过量或 纯度不佳	减少cDNA模板用量（以减 少对PCR的抑制作用）
	引物降解或 设计不合理	重新配制或设计引物（适 当的增加引物长度可提高 引物和模板间的特异性）
	酶量过少	对50μl反应体系，将酶量从 标准的5U增加到到7.5~10U
出现杂带 或弥散	循环条件 不合适	尝试两步法或 Step down PCR
		减少2~5个循环
	引物降解或 设计不合理	重新配制或设计引物（适 当的增加引物长度可提高 引物和模板间的特异性）
	模板过量	按照说明书中推荐模板用 量添加
	酶量过多	对50μl反应体系，将酶量从 标准的5U减少到1.25~2.5U

除了2×快速高保真PCR预混反应液,，我公司还供应以下相关产品：
 

货号	名称	规格
BTN130307	25mM氯化锰溶液(PCR级MnCl2溶液)	5mL
BTN131212	PCR Mix染料	10mL
BTN130815	taq酶抗体	500U
BTN160903	可调式易错PCR试剂盒	100次
BTN130308	一管式双链cDNA合成试剂盒	10次
YT371	Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer)	200U|1000U|5000U
WE0118	结核分枝杆菌基因分型试剂盒(VNTR-9)	50次
WE0126	防污染多重PCR MasterMix(含UNG酶)	1ml
WE0140	实时荧光定量PCR预混体系(SYBR GreenⅠ)	5ml
ALH209	KOD DNA聚合酶	250U|500U
ALH282	PCR增强剂	1ml
ALH268	耐热第一链反转录PCR试剂盒	20μl×25次|20μl×50次
RFT093	2×pfu PCR MasterMix	500μl|5×500μl
RFT097	5×加A反应液	20次(200μl)
JN0018	Taq Plus DNA聚合酶	250U
JN0020	Phi29 DNA聚合酶	125U
JN0051	一步法RT-qPCR试剂盒(SYBR Green)	100次
JN0061	RNA/单链DNA染料(SYBR Green)	500μl
QN0962	通用引物 T3	250μl(10uM)
QN0967	dNTPs Mix(2.5mM each)	1ml
HQF09	组织-细胞免抽提直接PCR试剂盒	100次/400次
MT0029	Bst DNA/RNA聚合酶3.0	1600U|16000U
GL1304	二磷酸腺苷溶液(ADP,1mmol/L)	10ml
GL1308	乙酸盐缓冲液(0.05mol/L,pH5.0)	500ml
QN2056	热启动Taq DNA聚合酶	500U|1000U
WH0007	血液样本直接PCR试剂盒	100次|500次
WH0066	PCR增强剂	500μL
WH0072	热启动高保真Taq DNA聚合酶	250U|500U
WH0074	2×Pfu PCR预混反应液	1ml（不含染料)|5×1ml（不含染料)|1ml（含蓝色染料)|5×1ml（含蓝色染料)
WH0079	多重PCR试剂盒	50次|100次