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- xuanya
- 美国/中国
- XY-TE-1009
- 2025年11月22日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
两年
- 英文名：
Saccharomyces cerevisiae INVSc1
- 库存：
900
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
EBY100 是酿酒酵母菌株，属于真核细胞，具有氨苄和卡那霉素抗性。 质粒转化条件为电转化，应用于酵母表面展示。此菌株必须生长在营养丰富的 培养基中，例如 YPD 培养基，无法在 minimal media 中生长。在 GAL1 启 动子的作用下，此菌株能够表达 AGA1 基因。EBY100 的配套载体是 pYD1 载体。
此菌株的基因型如下：MATα ura3-52 trp1 leu2∆1 his3∆200 pep4::HIS3 prb1∆1.6R can1 GAL (pIU211: URA3)。
INVSc1酵母菌种运输及保存：
低温运输，-80℃保存，有效期一年。
自备试剂：YPD 培养基、TE 缓冲液（pH 7.5）、乙酸锂、DTT、山梨醇、超纯水等
INVSc1酵母菌种使用方法
本手册提供一个质粒转化酵母的电转化方法，供参考。
一、感受态细胞制备
1. 挑一环酵母菌接种于 5 mL YPD 培养基中，30℃、250-300 rpm 培养 过夜；
2. 取适量的过夜培养液分别接种于两瓶 50 mL YPD 培养基中，30℃、 250-300 rpm 培养约 16-18 小时（OD：1.3-1.5）；
3. 于 4℃，4000 g 离心收集菌体，用 25 mL 冰浴的无菌水洗涤一次后，细胞用 10 mL 冰浴的无菌水重悬，可换成较小的离心管；
4. 加入 1 mL 的 10×TE 缓冲液（pH 7.5），摇晃均匀，再加入 1 mL 10 ×乙酸锂，旋转摇匀，于 30℃轻轻摇动 45 分钟；
5. 再加入 0.4 mL 1 mol/L DTT，并同时旋转摇动，于 30℃轻轻摇动 15 分钟；
6. 于 4℃，4000-6000 g 离心，弃上清（用枪吸），再用 25 mL 冰浴的无 菌水洗涤后 4℃离心，收集菌体；
7. 用 2.5 mL 冰冷的 1 mol/L 山梨醇重悬细胞，离心收集菌体，弃上清（用 枪吸）；
8. 每管用 100 uL 1 mol/L 的山梨醇溶解，分装于 EP 管中（80 uL/管）， 于-70℃冰箱保存。
INVSc1酵母菌种二、电转化
1. 向感受态细胞中加入约 5～10 ug（体积小于 10 uL）的 DNA，用枪吹 吸均匀，转移至预冷的电转杯中，静置 5 分钟；
2. 擦干电转杯，电击，电击参数：1.5 KV，25 uF，200 欧姆（详细请参 考电穿孔仪的说明书）；
3. 立即加入 1 mL 预冷的 1 mol/L 山梨醇，轻轻吹吸混匀，转移至 EP 管 中，于 30℃静置 1 小时；
4. 离心，弃上清，加入 1 mL YPD 后，于 30℃、200 rpm 培养 2 小时；
5. 离心得菌体后，吸除 550 uL 上清液，然后按 150 uL/板在相应的选择 培养基平板，于 30℃培养 3-6 天，直到平板上出现菌落。
（注：酿酒酵母适宜的生长温度是 30℃，温度超过 32℃可能导致细胞的死亡。）
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文献和实验问：我手头现在有200多株的野生酵母菌需要鉴定，可不知道如何确定一个大的思路。谢谢指点！另外能否推荐一下有关酵母菌鉴定方面的书籍以及如何才能得到此类书籍。自己找了好多的地方，都没能发现比较新的这方面的书籍。 答：有两类方法：生理生化方法：法国生物梅里埃公司是微生物鉴定方面的权威，它们的鉴定方法曾被认为是鉴定界的金标准。它们所生产的快速鉴定条可以比较快速地鉴定很多不同种类的酵母，或者你可以参考一下生物梅里埃公司的酵母鉴定的方法和原理。分子生物学方法：至于用分子生物学鉴定的方法现在应用也非常广泛
性的演化长期以来使生物学家感到困惑。它似乎是浪费时间和精力，还会打破有利的基因组成。那么为什么还要有性的演化呢？关于这个问题有大量理论解释，但分辨这些理论所需的数据却很缺乏，因为难以设计能将不想要的变量排除在外的实验。现在，利用一种用基因工程方法获得的、只包括性繁殖基本内容的无性酵母菌种，可将外来因素排除掉。很多现代理论都是以性能够增加遗传变异、从而能使自然选择更为有效的思想为基础的，研究发现，处在严酷环境中的具有最低组成的酵母体系属于这种情况。但在很少有或没有选择的良好环境中，性没有
实验步骤 小剂量： 1． 制作感受态。 a. 在500ml锥形瓶中摇100ml 酵母菌种直到OD值达到0.4（30℃），然后分装为两个50ml离心3000g五分钟。 b. 弃上清，用20mlddH2O 冲悬，离心3000g五分钟。 c. 弃上清，用10ml 1XTE/LiAc冲悬，离心3000g五分钟。 d. 小心弃上清，用175μl1XTE/LiAc冲悬。 2．
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