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- xuanya
- 美国/中国
- XY-TE-0842
- 2025年11月21日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
两年
- 英文名：
dA Tailing Kit
- 库存：
900
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品利用 Taq DNA polymerase 的不依赖于模板的末端转移酶活性， 在只有 dATP 存在的情况下，在平末端的 DNA 片段加上一个 dA 尾巴，使平末端片段也能被 T 载体克隆。
1. 简单，2 X Tailing Buffer 中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2. 适用于任何平末端的 DNA 片段，包括 Pfu DNA polymerase 等酶合成 的 DNA 片段。
3. 产物可以直接用于与 T 载体的连接。
克隆及表达产品运输及保存：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：PCR 片段、超纯水
克隆及表达产品使用方法
一：反应前纯化处理：
用 Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo 等具有 3 到 5 外切活性的 DNA 聚合酶 扩增得到的 DNA 片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程（如酚/氯 仿抽提或 Proteinase K 处理），否则它们将在加 A 反应时，切除掉加上的 A 尾巴，干扰反应。可以采取胶回收和酚/氯仿抽提法等常规方法纯化，最后溶 解在水或 TE 中，终浓度以 0.1 ug/uL 为宜。
克隆及表达产品二：加 A 反应
在干净的 0.5 mL 或 1.5 mL 离心管中，分别加入下列成分：
回收的 DNA 片段(0.2-2 ug)
25 uL 2 X dA Tailing Buffer
1 uL Taq DNA polymerase（5 U/uL）
补水到 50 uL 后 72℃保温 2 小时
三：反应后处理
加A反应后，Taq DNA polymerase 将与 DNA 末端紧密结合，所以必须酚/氯仿抽提去除。如果使用 Proteinase K 处理后再用酚/氯仿抽提效果会 更好。得到的 DNA 溶于适量水和 TE 中后即可用于 T 载体的连接反应。
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文献和实验之所以首先介绍Novagen公司的产品是因为用过它的pET系列载体，感觉很好用。Novagen的母公司是德国默克（Merck）公司，它是国际著名的化学及制药公司总部位于德国的Darmstadt，已有300多年的历史。已在全世界55个主要国家设立了分公司，其中在28个国家建有62个生产基地。 Novagen公司出品的pET系列载体是目前应用最为广泛的原核表达系统，已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白。pET系列载体是利用大肠杆菌T
pET系列载体之所以首先介绍Novagen公司的产品是因为用过它的pET系列载体，感觉很好用。Novagen的母公司是德国默克（Merck）公司，它是国际著名的化学及制药公司总部位于德国的Darmstadt，已有300多年的历史。已在全世界55个主要国家设立了分公司，其中在28个国家建有62个生产基地。 Novagen公司出品的pET系列载体是目前应用最为广泛的原核表达系统，已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白。pET系列载体是利用大肠杆菌T7噬菌
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