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- xuanya
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- XY-TE-0797
- 2025年11月21日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
两年
- 英文名：
Single Cell Lysis Solution（RNA）Embryonic Cell Lysis Solution
- 库存：
900
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
单细胞裂解液（RNA专用）是单细胞RNA提取专用裂解液，产品经过多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸的稳定性。单细胞裂解物可以直接用于测序和 RT-PCR 等试验。 本产品足够使用200次以上。 胚胎裂解液用于将卵裂球（blastomere，含2-8个细胞）分离成单个胚胎的溶液，得到的单个细胞如果用于DNA分析（如全基因组扩增或 PCR），则可直接 用于单细胞裂解液（DNA 型）裂解；如果用于 RNA 分析（如 RT-PCR），则可直 接用于单细胞裂解液（RNA 型）裂解。本产品不能用于胚囊（blastocyst，含 70-100 个细胞）。
单细胞裂解液(RNA)运输及保存：
低温运输，4℃保存，有效期一年。
自备试剂：PBS 溶液（可向xuanya另购）
单细胞裂解液(RNA)二、用培养细胞或实体组织制备单细胞：
3. 按常规胰酶方法处理培养细胞或组织，将细胞重悬于自备的液体细胞培养基 中。
4. 按常规方法对细胞进行计数。
5. 转移 100-4000 个细胞到新离心管中，400 g 离心 4 分钟沉淀细胞，小心弃 上清（培养基）。
6. 将细胞沉淀重悬于 50 uL 自备的 PBS 溶液中，使其终浓度为 2-80 个细胞 /uL。
7. 在干净培养皿上点加数个 5 uL PBS 溶液小液滴，加入 5 uL 细胞悬浮液到第 一个小液滴中，然后再从第一个小液滴中转移 5 uL 到第二个小液滴，如此系 列稀释样品数次，使得其浓度接近每 2.5 uL 液体中含 1 个细胞，放冰上待用。
三、用卵裂球（blastomere，2-8 细胞胚胎）制备单个细胞：
8. 在培养皿中点数个含 5 uL 胚胎裂解液（CAT#:130806）的小液滴。
9. 显微镜下用微量注射液加入一个卵裂球到一个胚胎裂解液小液滴中。
10. 转移几次到后面的几个液滴中以便将带入的培养基稀释掉。
11. 在最有一个液滴中，卵裂球的几个细胞将彼此分开成单个细胞。
12. 取单个细胞，转移到数个含 5 uL PBS 溶液的小液滴中洗涤掉胚胎裂解液。
13. 在显微镜下用显微注射仪取只含一个细胞的 2.5 uL 样品并转移到一个 200 uL 的 PCR 管中待用。同时设置无样品的阴性对照（2.5 uL 样品中不含细胞）。
单细胞裂解液(RNA)四、用单细胞裂解液裂解细胞
14. 在显微镜下用显微注射仪取 2.5 uL 样品，确认含一个细胞后，将其转移到一 个含 2.5 uL 单细胞裂解液的 PCR 管中。最好同时设置无样品的阴性对照（2.5 uL 样品中不含细胞）。
15. 在 2.5uL 样品中， 显微镜下细胞悬液可直接用于单细胞裂解反应。
16. 裂解后可以放冰上待用，如果长期不用，可以放-80℃保存。一般-80℃放置 过 30 分钟到一周时间的样品 PCR 扩增效果最好。
五、单细胞裂解物的 PCR 扩增
17. 细胞裂解物从-80℃中取出后，先在 65℃中保温 10 分钟，然后在放冰上放置 待用。
18. 以上步得到的细胞裂解物为模板。按常规方法进行 PCR。
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文献和实验流程如下： 基于 TCR/BCR 检测的 V(D)J 区域靠近 5' 端，故免疫组库测序所用磁珠标签序列由也单细胞最末端的 polydT 序列改为 TSO 序列，构成 read1+barcode+UMI+TSO 的标签组成，用于单细胞的捕获识别和后续 5' 端 RNA 的抓取捕获。 如图, 凝胶珠上的序列中，barcode 序列用于标记细胞，UMI 序列用于标记转录本，而 TSO (template switch oligo) 用于 5’ 端捕获。 当磁珠与细胞结合并在油包水环境中反转
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