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- XY-TE-0765
- 2025年11月06日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
两年
- 英文名：
Universal RT-LAMP Kit
- 库存：
900
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产本试剂盒可以用于 RT-LAMP 等温扩增，RT-LAMP 即逆转录和 Loop-Mediated Isothermal Amplification（环介导等温扩增）的结合，专门用于快速扩增 RNA。LAMP 是 2000 年才出现的一种新颖的等温核酸扩增 方法。它利用 4 或 6 条模板专一的特异引物和具有链置换能力的 DNA 聚合 酶，在等温条件下(63℃左右) 30－60 分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异 性和检测范围等指标上能媲美甚至优于 RT-PCR 技术，同时还不需要模板的 热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。 目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快 速检测。本试剂盒具有下列特点：
1. 高特异性，由于同时使用 4-6 条特异引物，所以特异性比 RT-PCR 更高。
2. 高扩增效率，扩增效率可达到 10E9-10E10，比 PCR 灵敏一个数量级， 可检测到单拷贝的 RNA 分子
3. 65℃左右完成 RT 和 LAMP 扩增，不需要贵重的热循环仪。
4. 即开即用，包含了除引物和模板 RNA 外的所有成份，十分方便。
5. 肉眼检测扩增结果，不需要昂贵的电泳、荧光 PCR 等仪器。
6. 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。
通用型RT-LAMP试剂盒运输及保存：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：RNA 模板及 RT-LAMP 引物（4 或 6 条）
使用方法
通用型RT-LAMP试剂盒1. 在冰上溶解除酶外的各种组份，混匀，稍离心。在反应管中加入以下组份
注：如在反应管中加入本公司PCR级绿如蓝染料1uL（水则少加1 uL），则可直接在荧光定量PCR仪中进行荧光定量检测。
2. 混匀，置于60-65℃保温30-120分钟。注意：如果不使用Loop引物，则 最好保温120分钟；如果使用Loop引物，则最好保温30分钟。
3. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。此酶有外切酶活性，所以必须灭活。
4. 产物置于-20℃备用或立即用于下游检测。扩增产物可选下列方法之一检 测:
1) 琼脂糖凝胶电泳。取扩增产物5 uL，1-2%的琼脂糖凝胶电泳，可 见LAMP特征性电泳图谱；
2) 向扩增产物中直接加入本公司PCR级绿如蓝染料（另售）1 uL，混 匀，稍离心。将反应管置于紫外透射仪或凝胶成像系统中，紫外灯 下可见绿色荧光产生；
3) 荧光定量检测。
5. 结果分析：
1) 如果没有扩增，则需要用本试剂提供的阳性对照进行扩增。本试剂 盒提供阳性对照，反应按下表设置：
混匀后，置于60℃保温120分钟，其余操作同上。注意：本对照引物 中没有Loop引物，所以最好保温120分钟。
如果阳性对照能够扩增出，则说明试剂盒没有问题，可能是模板或引 物的问题。如果阳性对照没有扩增出条带，则是试剂盒的问题，请跟 厂家联系。
通用型RT-LAMP试剂盒注意事项：
1. 引物设计对成功扩增十分关键。除用于 SNP 分型外，尽量以保守区 设计引物。
2. 引物至少包括 F3/B3 和 FIP/BIP，加入环状引物 F loop/B loop 可以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC 含量和尽量避免二级结构。
4. 反应中各个引物的浓度及比例对扩增效果有一定的影响。
5. 建议先将所有引物混合在一起，配制成 10´浓度以方便使用。
6. LAMP 扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设 备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通 PCR 扩增更加容易污染导 致假阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严 格的实验分区、添加 UNG 和 dUTP（可能导致反应效率下降）、使 用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，所有相关试 剂必须全部更换，必要时还得更换实验室。
7. 要确证扩增的为目标基因，可以使用特定的限制性酶切和/或 Southern 杂交。
8. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品等用途。
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文献和实验请教real time PCR的RT部分能否使用传统半定量RT-PCR试剂盒的反转录部分？
各位老师： 您们好！偶欲做几个基因的RT-PCR实验。偶先用传统的半定量两步法RT-PCR试剂盒(TaKaRa DRR019A)扩增了几个基因，并用该试剂盒反转录了不少cDNA。但还有2个基因偶打算用real time PCR法来扩增。拟采用TaKaRa DRR041S试剂盒。但是TaKaRa DRR041S试剂盒说明书上写的反转录步骤是使用另外一个单独的RT Reagents (TaKaRa DRR033A)，得到cDNA再用TaKaRa DRR041S试剂盒扩增。但是仅一个RT
释放酶活；一类是抗体法修饰的热启动酶，如 Champagne Taq ，预变性 95℃30s 即可释放酶活。使用时注意预变性时间，方能获得满意的扩增效果。 2. 选择 Lamp 扩增长片段 大于 5Kb 的长片段又该如何扩增呢？如果实验对保真度的需求不高，那么就可以使用 LAmp DNA 聚合酶。其保真度是 Taq 酶的 6 倍，可扩增超过 20Kb 的基因组、cDNA 片段，对于低拷贝、低纯度、以及不同 GC 含量的模板都具有很高的成功率。 3. 选择高保真酶快速高效扩增 如果实
sit for 2 hours. Transfer worms with a Pasteur pipet in as little liquid as possible to a feeding plate. Allow the plates to sit at room temperature (RT) or at 20°C for 30 minutes to 2 hours to pass the dye out of the digestive tract
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