- ￥2800
- YLKBIO
- YLK-PCR0146
- 国产
- 2025年07月11日
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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 英文名：
Basic LAMP Amplification Kit
- 保质期：
1年
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
50T
产品及特点
本产品是 2 ×LAMP MagicMix， 可以用于 LAMP 等温扩增， LAMP 即 Loop-Mediated Isothermal Amplification（环介导等温扩增），是 2000 年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用 4 条模板专一的特异引物和具有链置换能力的 DNA 聚合酶，在等温条件下(63℃左右) 30－60 分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于 PCR 技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。目前已成功应用于人类及动植物、细菌、病毒、寄生虫、真菌等病原体的快速检测。本试剂盒具有下列特点：
- 即开即用的 2×LAMP MagicMix，A 型含有红色电泳示踪剂，扩增后可以直接上样，不需要上样液。
- 高特异性，由于同时使用 4-6 条特异引物，所以特异性比 PCR 更高。
- 高扩增效率，扩增效率可达到 10E9-10E10，比 PCR 灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的 DNA 分子
- 65℃左右等温扩增，可以不需要贵重的热循环仪。
- 即开即用，包含了除引物和模板 DNA 外的所有成份，十分方便。
- 肉眼检测扩增结果，不需要昂贵的电泳、荧光 PCR 等仪器。
- 本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增。
- 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。
注：本产品 A 型（100203A）中加入了专用示踪染料。
规格及成分
| 成 份 | 热封袋包装 |
| 2×LAMP MagicMix，含示踪染料 | 500 μL（绿色盖） |
| LAMP 阳性对照模板-引物混合物 | 45 μL（黄色盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
| 成 份 | 热封袋包装 |
| 2×LAMP MagicMix，不含示踪染料 | 500 μL（绿色盖） |
| LAMP 阳性对照模板-引物混合物 | 45 μL（黄色盖） |
| 使用手册 | 1 份 |
运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂
LAMP 模板、LAMP 引物、自备可见光染料
使用方法
- 制备模板DNA：选用合适的方法制备模板DNA。
- 配制自备的5×LAMP引物混合液。先加超纯水或自备TE缓冲液将自备的下列6种（或4种）引物干粉稀释到母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，最后得到1mL的5×LAMP引物混合液，此混合液足够250次20μL体系的LAMP扩增。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积异于1mL，则各 成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2年
引物名称 母液浓度 加母液量 在 5×LAMP 引物
混合液中的浓度FIP 引物 100 μM 80 μL 8 μM BIP 引物 100 μM 80 μL 8 μM F3 引物 100 μM 10 μL 1 μM B3 引物 100 μM 10 μL 1 μM Loop F 100 μM 20 μL 2 μM Loop B 100 μM 20 μL 2 μM 超纯水 780 μL 如果没有 Loop 引
物，则用水替代终体积 1 mL
| 成份 | 样品管 | LAMP 阳性对照 |
LAMP 阴性对照 |
| 2×LAMP MagicMix | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
| 自备 5×LAMP 引物混合液 | 4 μL | - | 4 μL |
| 自备模板 DNA | 1-100ng | - | - |
| LAMP 阳性对照模板-引物混合物 | - | 4 μL | - |
| 补自备超纯水到 | 20 μL | 20 μL | 20 μL |
注意：此步可加入自备的各种LAMP可视化染料，这样反应结束后可以根据反应液的颜色变化或实时荧光强度变化来判断是否有扩增，不需要开盖，避 免污染。如果加入了荧光染料，则需要在荧光定量PCR仪上进行反应和实时检测。
- 混匀，置于63℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴或水浴保温，没有热盖，必须覆盖50μL的石蜡油，否则保温期间
- 产物取扩增产物5 μL直接上样（本产品A含有红色电泳示踪剂，不需要再加上样液，红色示踪剂的泳动速度相当于50bp的DNA）进行2-3%的琼脂糖凝胶电泳，可见LAMP特征性电泳图谱。
- 结果分析：如果本试剂盒提供的阳性对照-引物混合物能够扩增而阴性对照不能扩出，则实验有效。如果阳性对照-引物混合物没有扩增出条带，则试剂盒的问题，请跟厂家联系。如果阴性对照（水作为模板）有扩增出条带， 则说明LAMP样品或试剂有过去的扩增产物的污染，需要注意操作的规范性，如果不能解决，可以重新设计引物扩增新的靶片段。也可以使用不需要
注意事项
- 引物设计对成功扩增十分关键，尽量以保守区设计引物。
- 引物至少包括 F3/B3 和 FIP/BIP，加入环状引物 F loop/B loop 可以使反应速度大大提高。
- 应优化引物序列、GC 含量和尽量避免二级结构。
- LAMP 扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通 PCR 扩增更加容易污染导致假阳性。因此，必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验 分区、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染，很难去 除，最好重新设计引物扩增新的靶片段。
- 要确证扩增的为目标基因， 可以使用特定的限制性酶切和/ 或
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文献和实验组织WHO、各国学者和相关政府部门的关注，短短几年，该技术已成功地应用于SARS、禽流感、HIV等疾病的检测中，在这次甲型H1N1流感事件中，日本荣研化学公司接受WHO的邀请进行H1N1 LAMP试剂盒的研制。通过荣研公司近十年的推广，LAMP技术已广泛应用于日本国内各种病毒、细菌、寄生虫等引起的疾病检测、食品化妆品安全检查及进出口快速诊断中，并得到了欧美国家的认同。LAMP方法的优势除了高特异性、高灵敏度外，操作十分简单，对仪器设备要求低，一台水浴锅或恒温箱就能实现反应，结果的检测也很简单，不需要像PCR
做LAMP实验有一年多的时间了，其间共做了3个关于LAMP的课题，目前为止基本没有污染~尤其是自己的毕业论文，用完了500uL的 FIP，全部开盖跑电涌，没有一次污染。今天为止做完了所有毕业实验，坐下来总结一下自己的心得~~我只是个小硕士生~~所以都是在浅显的方面叙述，希望大家不要鄙视~~首先感谢一下LAMP交流群，没有这么多老师和同伴在，我不可能顺利毕业。比较可惜的是群里现在人满了。下面开始正文~~1. 引物我一共用过8组引物，所有课题加起来。primerexplorer的引物有效性最高
释放酶活；一类是抗体法修饰的热启动酶，如 Champagne Taq ，预变性 95℃30s 即可释放酶活。使用时注意预变性时间，方能获得满意的扩增效果。 2. 选择 Lamp 扩增长片段 大于 5Kb 的长片段又该如何扩增呢？如果实验对保真度的需求不高，那么就可以使用 LAmp DNA 聚合酶。其保真度是 Taq 酶的 6 倍，可扩增超过 20Kb 的基因组、cDNA 片段，对于低拷贝、低纯度、以及不同 GC 含量的模板都具有很高的成功率。 3. 选择高保真酶快速高效扩增 如果实
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