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- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0742
- 2025年11月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
Second Strand cDNA Synthesis Kit
- 库存：
950
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
cDNA第二链合成的原理是用RNaseH使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，再用DNAPolymeraseI通过切口平移(nicktranslation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链，其示意图如下:
cDNA第二链合成试剂盒本产品具有下列特点：
1.即开即用，含有合成cDNA第二链的所有试剂。
2.所得双链cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-timePCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。
cDNA第二链合成试剂盒运输及保存：
低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：cDNA第一链合成试剂等
cDNA第二链合成试剂盒使用方法
一、合成cDNA第一条链
本试剂盒不提供cDNA第一链合成试剂，用户需自备相关试剂合成cDNA第一链。
二、合成cDNA第二链
1.在冰浴上向已经完成合成cDNA第一条链的反应体系中依次加入下表试剂：
cDNA第二链合成试剂盒注：如果不需要将双链cDNA平末端化，则可以跳过T4DNA聚合酶处理步骤。
2.电泳5μL检测cDNA质量。如果cDNA在0.5-10Kb的范围内呈模糊一片，则cDNA合格。如果没看见cDNA或有其他异常，需查找原因后再继续。
3.所得cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-timePCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等实验。
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文献和实验1)离心沉淀cDNA第一链，并重悬在50μl水中，加50μl 2×第二链缓冲液(0.2mol／L Hepes，pH6.9，20m mol／L MgCl2，5 m mol／L DTT，0.14 mol／L KCl，1 m mol／L 4种Dntp)，混合均匀。 2)每微克底物加大肠杆菌DNA聚合酶K1enow片段20～50单位，15℃反应20小时，此酶能识别cDNA 3’末端发卡环，并以其为引物，cDNA第一链为模板，开始第二链的合成。 3)加0.5 mol／L EDTA 2μl
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