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- XY-TE-0245
- 2025年10月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
Blood Nuclear–Mitochondria DNAout
- 库存：
860
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是在本公司血液DNAout产品基础上开发的、专门用于从新鲜或冷冻的哺乳动物抗凝全血中同时提取细胞核DNA和线粒体DNA的试剂。它具有下列特点：
1.一份样品可以同时得到细胞核DNA和线粒体DNA，节约宝贵的实验材料。
2.DNA产率高。细胞核DNA产率一般为30-50ug/mL新鲜血液，线粒体DNA产率约为1ug/mL新鲜血液。陈旧血液DNA产率差别较大。
3.DNA纯净，OD260/OD280在1.8-2.0之间，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。
4.适用于哺乳动物血液，不适用于其他动物血液。
5.所用试剂安全无毒，健康环保。
血液线粒体和核DNA双提试剂盒运输及保存：
常温运输和保存,保存期限一年。
自备试剂：无水乙醇，75%乙醇。
血液线粒体和核DNA双提试剂盒使用方法
一：白细胞核和线粒体的分离
1.将3mL用EDTA抗凝管收集的新鲜血液转移到一个干净的15mL塑料离心管中。
注意：最好使用新鲜血液。对于陈旧血液，由于冻凝过程中冰晶已经对细胞
核膜和线粒体膜产生损伤，所以DNA得率会大大减少，具体减少多少根据冻凝时间长短不同而不同。
2.向血液中加入等体积（3mL）的D型红细胞裂解液；轻柔颠倒数次混匀，室温静置10分钟以裂解红细胞和白细胞的细胞膜，直至溶液变成清澈的红色。
注意：D型红细胞裂解液一旦打开后，非常容易污染细菌，未用完的部分最好-20℃保存，下次使用前，要溶解后充分摇匀。
3.室温下1000g离心10分钟沉淀白细胞核。
4.转移上清（含线粒体）到新的15mL塑料离心管中，注意不要触及白细胞核沉淀。
5.在白细胞核沉淀中加入3mLD型红细胞裂解液。轻柔颠倒数次混匀后，室温下1000g离心10分钟以沉淀白细胞核。
6.转移上清（含线粒体）到第4步所得的、已经含有上清的15mL塑料离心管中。将白细胞核沉淀放置冰上，和即将准备好的线粒体一起用于DNA提取，也可以放置在-20℃待用。
7.将汇集的含线粒体的上清于4℃下15,000g离心30分钟。
8.小心移弃上清，小心将线粒体沉淀重悬在1mLD型红细胞裂解液中，然后转移到1.5mL塑料离心管中，15000g离心5分钟，移弃上清得到线粒体沉淀。
9.用1mLD型红细胞裂解液洗涤线粒体2次（每次先重悬线粒体，再15000g离心5分钟得沉淀）。
10.所得线粒体可以直接用于DNA提取，也可放置在-20℃待用。
血液线粒体和核DNA双提试剂盒二：DNA的提取（下面步骤为白细胞核DNA提取和线粒体DNA提取通用）
11.在白细胞沉淀或线粒体沉淀中加入0.5mL溶液A，用移液枪吹打数次混匀后再加入75uL溶液B，混匀后于55℃温育10分钟。注意：溶液将成浑浊状。
12.再加入0.2mL溶液C充分颠倒混匀。
13.在4℃下13000g离心20分钟后，将上清（含DNA）转入一新的1.5mL塑料离心管中。
14.加入两倍体积的自备无水乙醇充分震荡混匀后，室温13000g离心5分钟，去尽上清。
15.加入1mL75%乙醇，充分混匀后室温13000g离心5分钟，去尽上清。
16.重复上步一次。
17.短暂离心，去尽残留溶液（此步十分重要，不要省略）。
18.短暂晾干半分钟，加入适量DNA洗脱液2.0溶解DNA（对细胞核DNA，可加入500uLDNA洗脱液2.0，对线粒体DNA，可加入50uLDNA洗脱液2.0）。
19.65℃保温15分钟以便彻底溶解DNA沉淀。溶解后的DNA可以立即用于后续的OD检测、酶切、PCR或其他实验，也可以放置在-20℃长期保存。
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