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- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0329
- 2025年11月01日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
Column Viral DNAOUT
- 库存：
860
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是在xuanya一管式病毒DNAOUT的基础上开发的、专门用于从血清(血浆)等液体样品及拭子（咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、阴道拭子等）中提取微量病毒DNA的产品，它具有下列特点：
1.操作简单，整个过程只需要20分钟左右，不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
2.灵敏度高，通过PCR检测到的最终灵敏度可以达到30-50拷贝/mL。
3.安全无毒，不需要使用和氯仿等有机溶液。
4.如果加上病毒离心富集步骤，最多可以处理1.5mL液体病毒样品。
5.与PCR和荧光PCR兼容。
6.价廉物美，性价比远高于国外同类产品。
7.适用于各种材料，包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。
96孔板病毒DNAout(真空法)运输及保存：
常温运输及保存，DNA病毒裂解液长期（1月以上）放置时需要放4℃，有效期一年。
自备试剂：无，但需要自备RNase-free的1.5mL离心管（耗材）。
96孔板病毒DNAout(真空法)使用方法
1.对于液体病毒样品：在1.5mL离心管中加入0.1-0.2mL液体病毒样品。如果病毒需要富集，可以将1.5mL液体在4℃24,000g冷冻离心60分钟，移弃1.3mL后剩下的0.2mL用于第2步处理。对于拭子样品：将一个拭子放入离心管中，加入1mL自备的生理盐水，振荡器上充分振荡半分钟，然后转移0.2mL到1.5mL塑料离心管中，用于第2步处理。
2.加入0.6mLDNA病毒裂解液到第一步得到的0.2mL样品中，振荡30秒混匀后室温放置10分钟。
96孔板病毒DNAout(真空法)注意：DNA病毒裂解液在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3.短暂离心后将500uL溶液转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
4.12,000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
5.将剩余溶液短暂离心后全部转移到步骤3的离心吸附柱中，室温放置2分钟。
6.12,000rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
7.加入0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000rmp室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
8.12,000rpm室温离心1分钟（干甩），弃含穿透液的离心管。
9.将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的RNase-free的1.5mL离心管中，在离心吸附柱的滤膜的中部加入30-100uLDNA洗脱液3.0，然后室温放置2分钟。
10.12,000rpm室温离心1分钟，离心管中的溶液即为病毒DNA溶液。
11.DNA样品可以直接用于PCR，也可放-20℃长期保存。
96孔板病毒DNAout(真空法)疑难解答
Q：提取液体样品/病毒核酸(RNA或DNA)为何很难？
A：原因一是量少。病毒颗粒中的RNA或DNA是作为遗传物质保存，每个病毒最多只携带几个拷贝(而一个细胞中有上万种RNA分子，每种RNA有很多拷贝)，同时其长度也十分有限(一般不到细胞基因组的万分之一)，样品中病毒数往往又不是很多，使得样品中病毒核酸的绝对量往往比一个细胞中核酸的绝对量还少，所以操作中十分容易丢失。另外，由于得到的核酸绝对量很少，不能使用电泳和测OD检测，只能通过PCR或RT-PCR检测，而PCR或RT-PCR的条件又需要优化，所以要确定提取是否成功十分不容易。
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文献和实验7.病毒DNAout(病毒DNA快速提取液)：3674-10 10 次 190元 产品介绍 （1） 柱式小量质粒DNA抽提纯化试剂盒 1. 采用和Qiagen相同的硅胶膜吸附核酸的原理 2. 制备的质粒一般没有RNA污染 3. 能够最大程度的清除蛋白及细胞中其他有机化合物等杂质 4. 快速纯化的质粒可用于酶切，PCR，转化，测序等常规实验，也可用于耐受性高，对内毒素不十分敏感的细胞株的转染。 5. 从1-5ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取近15-40μg纯净的高拷贝质粒DNA，提取
为recA+，质粒DNA易发生突变，DH5α或JM109，XL1-blue菌株为重组缺陷性菌株，可稳定扩增已鉴定的重组质粒），扩增细菌并纯化质粒。 三、重组病毒质粒转导293细胞 1、293细胞培养：转导24小时前，以方瓶为例，接种2×106 293细胞于25cm2方瓶，使生长密度约50-70%.（也可以使用6孔或96孔板） 2、以PacI单酶切重组病毒质粒（转导25cm2方瓶约需4ugDNA），完全线性化后，乙醇沉淀，再以20 ul ddH2O溶解。 3、脂质体包裹质粒
为重组缺陷性菌株，可稳定扩增已鉴定的重组质粒），扩增细菌并纯化质粒。 三 重组病毒质粒转导 293 细胞 1 293细胞培养：转导24小时前，以方瓶为例，接种2×106 293细胞于25cm2 方瓶，使生长密度约50-70%。（也可以使用6孔或96孔板） 2 以PacI单酶切重组病毒质粒（转导25cm2 方瓶约需4µgDNA），完全线性化后，乙醇沉淀，再以20 µl ddH2 O溶解。 3 脂质体包裹质粒（以Lipofectamine为例）:每4µ
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