洁特0.1～10µl灭菌 一次性微量吸头(无DNase/RN

Real-time PCR实验攻略

℃冷冻柜。在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。 1. 将组织在液N中磨成粉末后，再以50-100 mg组织加入1 ml Trizol液研磨，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%；提取细胞RNA时，先离心沉淀细胞，每5-10×106个细胞加1 ml Trizol后，反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞； 2. 将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30 ℃下放置5分钟

cDNA文库组标准流程

Superscipt II―RT，混匀; 7. 42℃反应50分钟，然后70℃，15分钟灭活反转录酶. 二、 cDNA 第二链的合成 : 1. 第一链反应完成后，取2μl一链产物－20℃冰箱中保存，待电泳检测。其余的产物合并，混匀，然后顺序加入下列试剂(promega): 20μl   10×DNA Polymerase I buffer 6μl    10mM dNTP(自己配制) xμl    dd H2O 1μl    RNase H(2U/μl) 10μl   DNA Polymerase

缓冲液配制指南

Buffer 配方 1.0 mol/L Tris•HCl（pH 6.8） 溶解后，用浓盐酸调 pH 至 6.8，最后用超纯水定容至 250 mL，高温灭菌后室温下保存。 1.5 mol/L Tris•HCl（pH 8.8） 溶解后，用浓盐酸调 pH 至 8.8，最后用超纯水定容至 250mL，高温灭菌后室温下保存。 10% SDS 取 SDS 10g，加蒸馏水至 100 mL， 50 ℃ 水浴下溶解，室温保存。如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。 10% 过硫酸胺（APS） 取