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文献和实验可使用： (3)灭菌物品：应该保证灭菌物品内部空气的排出和蒸汽的透人。对于长管腔、大体积的物品宜使用预真空压力蒸汽灭菌器并增加脉动次数．延长脉动时间和灭菌时间。 (4)物品的码放：物品的码放应该便于蒸汽流通，既不能太满又不能太少。 (5)实时监测灭菌过程：应该对灭菌锅内、套层内和蒸汽输送管道内的温度、压力等因素进行实时监测。应该对灭菌各步骤的时间进行记录。还可以根据危险程度对每一个灭菌包进行监测，此时一般可以采用化学指示卡(管)监测方法，也可以采用生物监测方法。 1)化学指示卡(管)监测
，保持15~20 min即可。由于消毒灭菌效果取决于温度而不是压力，所以在一定压力下保持较长的消毒灭菌时间是必须的。在121 ºC的蒸汽温度下可以很快杀死各种细菌及高度耐热的芽孢杆菌，因此许多培养液的消毒灭菌压力、温度一般保持在1.0~1.1 kg/cm2、121 ºC。消毒灭菌时间与需要消毒灭菌的培养液量密切相关(表2-3)，时间不足达不到灭菌效果，时间过长培养液内的一些化学物质遭到破坏，影响培养液成分。消毒灭菌结束后，关闭热源，只有当灭菌器内压力降为零时才能打开放气阀，排除剩余蒸汽，取出培养
气从排气阀中连续排出时），关闭排气阀。继续加热，待压力表渐渐升至所需压力时(一般是101.53 kPa，即15磅/英寸2，温度为121.3℃)，调解炉火，保持压力和温度（注意压力不要过大，以免发生意外），维持15~30 min。灭菌时间到达后，停止加热，待压力降至零时，慢慢打开排气阀，排除余气，开盖取物。切不可在压力尚未降低为零时突然打开排气阀门，以免灭菌器中液体喷出。 高压蒸汽灭菌法为湿热灭菌法，其优点有三：一湿热灭菌时菌体蛋白容易变性，二湿热穿透力强，三蒸气变成水时可放出大量热增强杀菌
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