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- 2025年07月14日
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60
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一步法质粒 DNAout 2.0
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
50 次
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
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一步法质粒 DNAout 2.050 次品牌详细介绍：
操作步骤:
1. 一步法质粒 DNAout 2.050 次品牌匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
实验要点：
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的（—氯仿—=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
以下是一步法质粒 DNAout 2.050 次品牌的相关产品：
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重组逆转录病毒载体转染试剂盒10次
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猪乙型脑炎病毒抗体IgG ELISA试剂盒 48T/96T 试剂盒 组装/原装
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CLIAKitforAPCELISAKit大鼠活化蛋白C规格：48T/96T
血清葡糖酸苷酶(GLUCURONIDASE)活性比色法定量检测试剂盒20次
Porcineierleukin2,IL-2ELISAKit猪白介素2(IL-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T
紫外线强度指示卡 UV iensity indicator card
121℃/132℃压力蒸汽灭菌指示卡 121 temperature /132 for pressure steam sterilization indicator card
PH广范试纸 PH wide range test paper
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T1N1Agar
新生霉素(改良E.C新生霉素增菌肉汤冻干配套试剂) 规格： 4.5mg/支x10 用途： 每支添加于225ml（028112）中配成改良E.C新生霉素增菌肉汤。
改良麦康凯肉汤冻干配套试剂 规格： 10支 用途： 每支添加于100ml（025106）或(025108)中
亚碲酸(山梨醇麦康凯培养基冻干配套试剂) 规格： 1.25mg/支x10 用途： 每支添加于500ml（025102）中配成山梨醇麦康凯培养基。
头孢磺啶(MUGal肉汤冻干配套试剂) 规格： 0.5mg/支x
一步法质粒 DNAout 2.050 次品牌BM液体培养基250g用于醋酸钙不动杆菌增菌培养
50023 BR 10 kg incubation media 50023 BR 10 kg
构巢裸胞壳 支/瓶
LBBroth(Lennox)
DTM添加剂2 1ml*5 每支添加于200ml DTM培养基中
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文献和实验同其他昆虫传播的疾病一样，首先应对昆虫等中间或储存宿主加以控制和消灭，如灭鼠、灭虱。5、立克次氏体病病因病理近年来，随着立克次氏体分子生物学（16srRNA序列、DNA-DNA杂交、全DNA或基因片段、质粒等）研究的进展，旧的立克次体分类已不能完全反映立克次目中所有种属的全貌，应运而生的是根据遗传物质对立克次体进行新的分类。16srRNA序列的分析显示，立克次体可分为两个亚群，α亚群包括立克次体（Rickettsia）、埃立克体（Ehrlichia）、埃菲比体（Afibia）、考德里体（Cowdria
理想。 我一共做过四五个重组质粒，其中插入片段，大的有2000bp左右的，小的也有200bp左右的。其中200bp~900bp的不大不小的片段相对好做，2000bp的难度相对较大。而其中最难做的恐怕就是ShRNA表达质粒了，RNAi技术这些年是一个热点，但是把一个只有63bp的小片断DNA插入到4000bp~5000bp的质粒DNA当中，并不是一件容易的事情。期间我们做了近百次的尝试，总结出这么一些经验： 1、质粒酶切方式的选择。现在看来，如果质粒的条件允许，最好选择双酶切。因为双酶切操作相对简单
mmol/L Tris HCl（pH8.0）10 mmol/L EDTA（pH8.0）Tips：这一步主要作用是重悬菌体，EDTA 是金属螯合剂，主要作用是防止下一步的裂解过程中内切酶对质粒进行切割。4. 加入 200ul 新配置的溶液 II，盖紧管口，快速颠倒离心管 5 次，切勿震荡，将离心管置于冰上。溶液 Ⅱ0.2 mol/L NaOH（临用前用 10 mol/L 贮存液现用现稀释）1% SDS Tips：菌体在强碱性条件下裂解，释放出包括质粒在内的核酸，蛋白等物质。注意混匀要轻柔
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