TdT加尾法DNA探针标记试剂盒

特别提示：包括TdT加尾法DNA探针标记试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：TdT加尾法DNA探针标记试剂盒
英文名称：TdT-Tailing DNA Labeling Kit
产品规格：5次

本试剂盒是基于TdT末端转移酶能够在DNA的3′端添加dNTP尾巴的原理而设计，该反应的示意图如下：


产品特点：
1.快速，15分钟即可完成标记反应。
2. 不但可用于单链DNA和DNA Oligo标记，还可用于3′突出的双链DNA标记，但后者标记效率稍低。
3.可用同位素底物和非同位素底物(生物素和Digoxin标记的核苷酸等)。
4. 提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带Digoxin标记核苷酸三种选择。
5. 同时提供非标记的dATP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。
6. 标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度RNA检测)、小RNA Northern、Southern Blot(不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。

试剂盒组成：

成分	规格
TdT缓冲液，5×	20μl
TdT(末端转移酶，10U/μL)	10μl
dATP，2mM	5μl
标记核苷酸	(A、B、C不同，见注)
超纯水	1ml
说明书	1份

注：A型用于自选标记，用户需自备标记核苷酸，本产品不提供标记核苷酸；B型提供5μl Biotin-11-dUTP；C型提供含5μl DIG-11-dUTP。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在0.2mL微量离心管中按下表设置一个20μl体系的标记反应(如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度)：

成份	用量
探针DNA	100-200 pmol
TdT Buffer，5×	4μl
标记核苷酸，1mM (A型需自备标记核苷酸)	1μl
dATP，2mM	(见下注)
TdT末端转移酶(10U/μL)	2μl
超纯水	补到20μl

注：dATP可以不加，但这样得到的加尾全部是标记核苷酸，由于空间阻碍，灵敏度不一定最佳。如果杂交效果不好，掺入一定比例的dATP到标记核苷酸中，以控制标记的密度，提高比活。具体比例如何可以自己优化。
2. 37℃反应15分钟，延长到30分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在，一般可以加尾3-5个Biotin或DIG标记的核苷酸(标记物空间阻碍抑制延长)；如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸dATP(其他dNTP也可，只是本试剂盒只提供dATP而已)，每条探针上可加上约100个核苷酸，平均含5个标记核苷酸
3. 70℃ 10分钟灭活TdT酶。
4. 如果需要，可以PAGE电泳+银染(相关试剂需要另购)检测标记效率，带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5. 如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/*仿抽提，因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
6. 使用时需将探针以1-8 ng/μL的终浓度加入到杂交液中(如果探针是双链DNA，加入前还需热变性)。如果不立即使用，非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针DNA不能放置。