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- 2025年07月16日
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卓强科技有限公司
膜片钳实验
技术简介
膜片钳技术是用微玻管电极（膜片电极或膜片吸管）接触细胞膜，以千兆欧姆以上的阻抗使之封接，使与电极尖开口处相接的细胞膜的小区域（膜片）与其周围在电学上分隔，在此基础上固定点位，对此膜片上的离子通道的离子电流（pA级）进行监测记录的方法。用场效应管运算放大器构成的I-V转换器是测量回路的核心部分。在场效应管运算放大器的正负输入端子为等电位，向正输入端子施加指令电位时，由于短路负端子以及膜片都可等电位地达到钳制的目的，当膜片微电极尖端与默片之间形成10GΩ以上封接时，其间的分流电流达到最小，横跨膜片的电流可100%作为来自膜片电极的记录电流（lp）而被测量出来。
细胞膜电位检测
技术简介
细胞膜电位包括静息电位和动作电位两种。静息电位是组织细胞安静状态下存在于膜两侧的电位差。动作电位是当细胞受刺激时，在静息电位的基础上发生的电位变化，可用荧光显微镜测定膜电位。
实验步骤
（1）将消化好的细胞移至DMEM中；
（2）加入FBS，控制浓度范围在：2-15%；
（3）加入DiBAC4(3)，控制浓度范围在：1-5 µmol/l；
（4）用荧光显微镜观察刺激后荧光强度的变化。[Ar激光(488nm)的激光共聚焦显微镜，由于DiBAC4(3)的荧光会随温度变化而改变，所以必须在37℃的条件下测定。由于细胞膜的电位会变化，可以观察细胞质内的荧光强度变化。
线粒体膜电位检测
技术简介
大量的研究表明线粒体与细胞凋亡密切相关，其中线粒体跨膜电位（MMP）的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中早发生的事件之一。它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前,一旦线粒体跨膜电位崩溃，则细胞凋亡不可逆转。
实验步骤
（1）细胞培养；
（2）诱导细胞凋亡，收集细胞；
（3）稀释Incubation Buffer；
（4）配工作液；
（5）将细胞均匀悬浮并孵育；
（6）Incubation Buffer洗两次；
（7）吸取重新悬浮细胞；
（8）流式细胞仪检测，分析。
实验图片
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文献和实验一、线粒体膜电位检测原理 线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性事件，发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体膜电位崩溃，细胞凋亡便不可逆转。 JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位∆Ψm的理想荧光探针，可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。JC-1有单体和多聚体两种存在状态，两者发射光谱不同。在正常细胞内，线粒体膜电位较高，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可产生红色荧光；凋亡早期，线粒体膜电位降低，JC-1不能聚集在线粒体基质中，此时JC-1为单体
通常是指以膜相隔的两溶液之间产生的电位差。生物细胞被以半透性细胞膜，而膜两边呈现的生物电位就是这种电位，平常把细胞内外的电位差叫膜电位。如果把两种电解质用膜隔开，使一侧含有不能透过该膜的粒子，由于这种影响，两侧电解质的分布便发生了变化，一旦董南（donnan）膜平衡建立膜两侧就会有董南膜电位。如果两侧没有这种不透性离子，但只要把浓度不同的两种电解质以膜隔开，在阳离子和阴离子透过膜的速度不同时，膜两侧也会产生电位差。在膜两侧放 0.1和 0.01N的 KCl溶液时产生的膜电位，作为表现膜
rhodamine methyl ester（TMRM）等可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。 一、方法将正常培养的细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为Rhodamine 123（1mM）或终浓度为DiOC6（25nM），JC-1（1mM），TMRM（100nM），37°C平衡30min，流式细胞计检测细胞的荧光强度。 二、注意事项1、始终保持平衡染液中pH值的一致性，因为pH值的变化将影响膜电位。 2、与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白，他们将与部分染料结合，降低
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