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- 细胞迁移与侵袭实验将 Transwel小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,将研究的细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究
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- 2026年01月03日
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北京百奥思科生物医学技术有限公司
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细胞迁移实验
实验介绍
细胞迁移与侵袭实验将 Transwel小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,将研究的细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
实验步骤
一、、材料准备
可拍照显微镜,Transwel室,孔径8um,没包被胶的(CosterpComning公司的也较常用).Transwel迁移实验的细胞培弄板24孔板，细胞培养板应当与购买的Transwel小室相配套,BD公司的Matige.无血清DMEM.(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基:DMEM完全培养基,1640完全培养基(也可加到20%血清).无PBS,棉签 胰酶,4%多聚.甲醛固定液或者甲醇,结晶紫染液(0.1%(g/ml)PBS结晶紫)
二、步骤和流程
2.1基质胶铺板
用BD公司的Matigel1:8(根据细胞产生mmp的量来决定)稀释,包被Transwel小室底部膜的上室面,置37℃C30min使Matigel!聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化,
2.2制备细胞悬液
①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12-24h,进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的,
②消化细胞,终止消化后离心弃去培养液,(用PBS洗1-2遍),用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至5x105/ml。
2.3接种细胞
①取细胞悬液100ul加入Transwell/小室,
②24孔板下室一般加入60u1含20S的培养基,特别注意的是,下层培养液和小室间常会有气泡产生,一旦产生气泡,下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了,在种板的时候要特别留心,一旦出现气泡,要将小室提起,去除气泡,再将小室放进培养板。
(③培养细胞:常规培养12-48h(主要依癌细胞侵袭能力而定)。24h较常见,时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外,处理因素对细胞数目的影响也不可忽视
2.4结果统计
直接计数法“贴壁”细胞计数,这里所谓的“贴壁"是指细胞穿过膜后,可以时着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去,通过给细胞染色,可在镜下计数细胞。取出Transwell小室,弃去孔中培养液,用无钙的PBS洗2遍,甲醇固定30分钟,将小室适当风干。
0.1%结晶紫染色20 min,用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞,用PBS洗3遍,400倍显微镜下随即五个视野观察细胞,记数。
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文献和实验），也可认为是一种有通透性的支架（ permeable supports ）。更准确地说， Transwell 应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是 Transwell 小室（ Transwell chamber ， Transwell insert ），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对 Transwell 会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜 ，而杯子其余部分
使Matrigel聚合成凝胶...阅读全文 Transwell的其他应用的实验步骤 1．Transwell肿瘤细胞迁移实验过程与Transwell侵袭实验基本一致，不同的只是不需要铺Matrigel。个人认为，由于没有基质胶的阻挡，细胞穿过膜的速度较侵袭实验明显加快，所以细胞量要更大。我做侵袭实验的细胞密度是1×105，而迁移实验的密度是1×106。另外，下层培养液的FBS浓度也可适当下调，我做侵袭实验的浓度是5%，迁移实验的浓度是2.5%。2．Transwell上皮细胞培养步骤做了一段时间的原代
做肿瘤研究的人，很少有不知道 transwell 实验的，它是用来研究肿瘤细胞的迁移侵袭转移情况的一种简便快捷的实验方法，还可以构建两种细胞的共培养体系以及趋化性试验。今天咱们就来讲讲怎么做肿瘤细胞的侵袭转移实验。Transwell 侵袭实验，其实原理简单地说就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在低营养的培养液里，为了找吃的，细胞会往高营养的培养液里面跑，但是有膜挡着，所以要穿过膜才行。我们在膜上涂上一层基质胶，模仿细胞外基质，于是细胞就要分泌金属蛋白酶将基质消化
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