蓝色预染蛋白Marker（19～117kDa)

特别提示：包括蓝色预染蛋白Marker（19～117kDa)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：蓝色预染蛋白Marker（19～117kDa)
英文名称：Pre-stained Protein Marker（19kDa～117kDa)
产品货号：WH0176
产品规格：20次（100μl)

本制品为几种蛋白质分别纯化预染后混合而成的蛋白质溶液，这些蛋白混合物与蓝色或彩色染料共价偶联，可在凝胶电泳时出现强度均匀的蛋白带，可以直接观察蛋白电泳及判断Western转移效果。同未预染的蛋白标准相比，预染蛋白Marker因与染料共价偶联而在SDS-PAGE电泳时的迁移特性发生某些改变。如果要精确判定分子量，推荐将我公司的非预染蛋白质Marker（目录号：WH0177）与预染蛋白Marker配合使用。适合于12%-15%SDS-PAGE电泳。无需加热，直接上样，使用更方便。本制品中每种蛋白约0.2-0.4μg/μl。



贮存液成分：62.5mM Tris-HCl（pH 7.5)；1mM EDTA；10mM DTT；30mM NaCl；33％甘油；2％SDS

附：
1× SDS-PAGE buffer:3.0g Tris.base （25mM)，18.8g Glycine （250mM)，1g SDS，用ddH2O定容至1L。
1× Transfer buffer（干转):5.8g Tris.base （48mM)，2.9g Glycine （39mM)，0.37g SDS，20％*醇，用ddH2O定容至1L。

保存条件：短期内多次使用置于4℃，-20℃保存一年。

使用方法：
使用前请将本预染蛋白质Marker置于室温或37-40℃数分钟，彻底溶解并震荡混匀后使用（请不要煮沸）。取5μl预染蛋白质Marker加入到凝胶（1mm厚mini-gel)孔内；若加样孔较大，可适当增加本预染蛋白质Marker的用量。适用于蛋白质凝胶电泳和蛋白质转膜等（从PAGE胶转移到NC膜或PVDF膜上）实验。

电泳条件：
凝胶浓度为12-15％ SDS-PAGE，Mini电泳装置，建议电泳条件为：电压120-200V，时间30-50min。

注意事项：
1．电泳时间过长将导致蛋白条带发散现象。
2．不适合低电压长时间（过夜)转膜。

除了蓝色预染蛋白Marker（19～117kDa),，我公司还供应以下相关产品：



名称：1mL亲和层析柱
货号：BTN140649
规格：1mL
本产品适用范围广泛，可用于纯化分离重组蛋白、抗体和抗原、多肽、糖蛋白、磷酸化蛋白、DNA及DNA结合蛋白等生物大分子；还可以用于去除生物样品中的内毒素等污染。

亲和层析是利用生物分子间所具有的专一亲和力而发明的纯化技术。它是利用生物分子间存在的特异性相互作用(如抗原－抗体、酶－底物或抑制剂、激素－受体等)，通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。

亲和层析柱常见的使用方法有重力法、手动加压法、蠕动泵法，其示意图如下：


储存条件：常温运输及保存，有效期一年。

常用亲和标签及纯化方案：


名称：高灵敏度ECL化学发光检测试剂盒
货号：WE0308
规格：50ml|250ml
  高灵敏度化学发光检测试剂盒是免疫印迹实验中与辣根过氧化物酶(HRP)配套使用的的高灵敏增强型检测试剂盒。该产品基于新一代增强型化学发光底物研制而成，在HRP的催化下产生高强度的信号，能够检测pg级别的抗原。灵敏度高、发光信号强烈持久，可以使用照相技术(X-光胶片曝光)或者其他成像方法(如荧光或化学发光成像仪)进行检测。

试剂盒组成：

组成	50ml	250ml
eECL-A(Luminol Enhancer)	25ml	125ml
eECL-B(Peroxide)	25ml	125ml

注意事项：
1、在与膜发生接触过程中，请佩戴手套且使用干净镊子等洁净器材，避免蛋白污染及高背景。
2、避光条件下，配制好的化学发光检测底物工作液可在室温下稳定保存8小时。阳光或其他强光会影响工作液，故应避免强光长时间的照射。正常实验室灯光短时间照射不影响工作液的使用。
3、百奥莱博提供多种蛋白转移用膜、封闭液、一抗、酶标二抗、缓冲液等，详情请查询公司网站。

操作步骤：
1、二抗孵育完毕后，将印迹膜充分洗涤。
2、根据需要量，将eECL-A和eECL-B按照1：1的比例等体积混合，配制为化学发光检测底物工作液(一张8 cm×6 cm的膜大约使用1ml工作液)。
3、弃去洗涤缓冲液，将发光底物工作液滴加在印迹膜上，确保工作液覆盖整张膜，室温孵育3-5分钟。
4、用移液器吸去多余发光底物工作液，将印迹膜置于两层干净的塑料薄膜之间，此过程应小心完成，避免膜与膜之间产生气泡。
5、在暗室内进行X-光胶片曝光，或将膜放置到化学发光成像仪内，按照仪器说明书进行检测。
 

问题	可能原因	解决方法
胶片反相(白色条带，黑色背景)	系统中HRP过量	稀释HRP标记物至少10倍以上
膜上出现棕色或黄色条带
暗室中看到强烈发光
发光信号持续时间过短
信号较弱或者无信号	发光反应系统中HRP 过多，消 耗底物过快，引起信号迅速降低	稀释HRP标记物至少10倍以上
	抗原/抗体量不够	增加抗原/抗体使用量
	蛋白转移率低	优化转移系统
高背景	系统中HRP 过量	稀释HRP标记物至少10倍以上
	封闭不足	优化封闭程序
	封闭试剂选择不当	选择另一种封闭试剂
	冲洗不充分	增加冲洗时间，次数
	曝光过度	减少曝光时间
	抗原/抗体浓度过高	降低抗原/抗体使用浓度
蛋白条带为点状	蛋白转移失败	优化转移过程
	膜未平衡	按照说明书处理膜
	胶片与膜之间有气泡	曝光前去除所有气泡
出现非特异条带 (高背景、信号维持时间较短)	系统中HRP过多	稀释HRP标记物
出现非特异条带 (背景干净信号维持时间正常)	一抗用量过多	进一步稀释一抗
	SDS 导致非特异结合	在实验过程中避免使用SDS

储存条件：2～8℃，避光保存