BL21感受态细胞

特别提示：包括BL21感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：BL21感受态细胞
英文名称：BL21（DE3) Competent E.coli
产品货号：WH0188
产品规格：100 μl×5|100 μl×10

本制品是采用大肠杆菌BL21（DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达10⁷，-70℃保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。质量稳定，使用方便，质优价廉。

该菌株用以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。

基因型：F- ompT hsdSB（rB- mB-) gal dcm（DE3）

保存条件：-70℃冻存，有效期6个月。

操作步骤：（以下操作均按无菌条件的标准进行）
1．取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。
注意：一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl感受态细胞为例。
2．向感受态细胞悬液中加入目的DNA（100μl的感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和)，轻弹混匀，在冰浴中静置30min。
3．将离心管置于42℃水浴中放置60-90 sec，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2-3 min，该过程不要摇动离心管。
注意：此步骤也可将离心管置于室温进行，时间不需十分准确，夏季或室温较高时，可放置5-8 min左右，如果室温较低，可延长时间至8-15 min左右。条件允许建议使用42℃热激方法。
4．向每个离心管中加入900 μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床振荡培养45 min（150rpm)，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5．将离心管内容物混匀，吸取100μl已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16h。
注意：涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多，可取更少量转化产物涂布平板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300 μl转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少，可通过离心（4000 rpm,2 min)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。（涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)。

注意事项：
1.感受态细胞应保存在-70℃，不可冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。
2.进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
3.为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到zuì低。

除了BL21感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：


BTN120514 即用型蓝白T载体D型(无RNA启动子，有MCS) 20次
BTN90504 大肠杆菌XL1-Blue化学感受态细胞 0.1mL*10
BTN60210 硫酸链霉素溶液 10mL
YT003 质粒大量抽提试剂盒 20次
YT465 C端DsRed标签融合蛋白质粒(红色荧光蛋白) 1μg
SY0297 pUC19 Vector 克隆载体 1μg
JN0101 Simple Cloning T载体(pSC-T) 20次
QN1054 50×Denhardt"s溶液 50ml
QN1055 鲑鱼精DNA(10mg/ml) 1ml
QN1063 pEGFP-N3 哺乳动物细胞表达载体 20μl
CZ037 T4 DNA连接酶(2000U/μL) 10万U/50万U
MQ0011 Stbl2化学感受态细胞 10×100μl/50×100μl
BTN160686A 零背景TA克隆试剂盒(Amp抗性) 25次
QN2142 BL21(DE3)感受态细胞 10×100μl|20×100μl
QN2875 脂质体转染试剂2000 0.75ml|1.5ml
WH0188 BL21感受态细胞 100 μl×5|100 μl×10