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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
大量
- 英文名:
BL21 Chemically Competent Cell
- 保质期:
三年
- 供应商:
上海钰博生物科技有限公司
- 保存条件:
低温保存
- 规格:
10×100ul / 20×100ul
| 编号 | 名称 | 规格 |
| YB07231 | BL21 Chemically感受态细胞 | 10×100ul |
E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS)
BL21感受态细胞说明:
BL21是最早开发的用于原核表达的菌株,BL21(DE3)、Rosetta、OrigamiB(DE3) 等一系列原核表达菌株均来源于BL21菌株。该菌株主要用于非毒性蛋白的表达,不含T7 RNA聚合酶,所以不能用于由T7启动子驱动的蛋白表达(如:pET系列);但含有大肠杆菌RNA聚合酶,可以用于tac或trc等使用大肠杆菌RNA聚合酶的原核系统的表达(如:pGEX,pMAL质粒)。BL21感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达107cfu/µg DNA。
BL21感受态细胞操作方法:
1. BL21感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700ul不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100ul左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
BL21感受态细胞注意事项:
1. 感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2 mM均可)。
5. 为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
BL21感受态细胞保存条件: -80℃
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文献和实验The Inoue Method for Preparation and Transformation of Competent E. coli: "Ultra Competent" Cells Joseph Sambrook Peter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne
Purification of dnEBNA-1/Soft from E. coli BL21 LysS
Inoculate 2ml of 5ml o/n culture of either p3133 (empty vector pET11a)or p3134 (dnEBNA-1/Soft)in E.coli BL21 LysS per 0.5L LB+ ampicillin (grow two 0.5L cultures of each) Incubate ~2hrs 37℃250rpm until OD600 = 0.4-0.6 Induce with 5ml 100mM ITPG
(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA1 2:BL21(DE3) 菌株 该菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。 基因型:F-,ompT, hsdS(rBB-mB-),gal, dcm(DE3
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