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- xuanya
- 中国/美国
- XY-DT-D-1326
- 2026年03月19日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Salmonella spp nucleic acid detection kit (PCR)
- 库存：
850
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 规格：
48T/50T
商品名称：沙门氏菌(SPP)核酸检测试剂盒(PCR法)
Name ：Salmonella spp nucleic acid detection kit (PCR)
【包装规格】48T/盒
沙门氏菌(SPP)核酸检测试剂盒(PCR法)【预期用途】
本试剂盒适用于检测标本中指标的定量检测，辅助诊断。
【试剂组成】
| 名 称 | 规 格 |
| 酶液 | 50μL×1 管 |
| 反应液 | 1.0mL×1 管 |
| 阳性质控品 | 50μL ×1 管 |
| 阴性质控品 | 250μL ×1 管 |
| 核酸提取液 | 1.5ml×2管 |
沙门氏菌(SPP)核酸检测试剂盒(PCR法)【检验原理】
本试剂盒对指标特异核酸序列设计引物和探针，用一步法荧光RT-PCR 技术对指标 RNA 进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。注：
1） 不同批号试剂不能混用。
2） 试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。
沙门氏菌(SPP)核酸检测试剂盒(PCR法)【使用方法】
1. 样品处理（样本处理区）
1.1 样本前处理
【标本采集】
咽拭子：应使用与用采样拭子，适度拭抹咽后壁和两侧扁桃体部位，应避免触及舌 部 ； 迅 速 将 拭 子 放 入 标 本 采 集 管 中 ， 旋 紧 管 盖 并 密 封 ， 以 防 干 燥 。
全血：疑似感染病人的静脉血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管，8000rpm 离心 2min，取适量上清液于 1.5mL 灭菌离心管中。痰： 以清晨的第一口痰为宜。先用清水漱口，嘱患者用力咳出深部的痰于无菌样本保存管，密封，即可送检。
【标本采集】
病死或扑杀禽，取喉气管、脑、胸肌、心肌和肺等组织；待检活禽，用棉拭子取呼吸道分泌物或排泄物，置于 1mL 50%甘油生理盐水中。
沙门氏菌(SPP)核酸检测试剂盒(PCR法)【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但丌能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。
1.2DNA 提取
1) 对上述处理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒温处理 10min，13,000rpm 离心 5min，取上清液转移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；
2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生产的 DNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请严格按照试剂盒说明书进行操作。
1.2 RNA 提取
推荐采用上海烜雅生物科技有限公司生产的RNA 提取试剂盒（离心柱提取法），请按照试剂盒说明书进行操作。
2. 试剂配制（试剂准备区）
根据待检测样本总数，设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1 管阴性对照+1 管阳性对照；样品每满 7 份，多配制 1 份)，每测试反应体系配制如下表：| 试剂 | 反应液 | 酶液 |
| 用量 | 20μL | 1μL |
3. 加样（样本处理区）
将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。4. PCR 扩增（核酸扩增区）
4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL；荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。
4.3 推荐循环参数设置：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 收集荧光信号 |
| 1 | 1 cycle | 42℃ | 20min | 否 |
| 2 | 1 cycle | 95℃ | 10min | 否 |
| 3 | 40 cycles | 94℃ | 15sec | 否 |
| 55℃ | 30sec | 是 |
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范围内调节)、
stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。
5.2 结果判断
阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，且有明显的扩增曲线。可疑：检测通道 Ct 值>35.0，且出现明显曲线的样本建议重复试验，重复试验结果如果同样出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线则为阳性，否则为阴性。
阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
6. 质控标准
阴性质控品：无明显扩增曲线且无 Ct 值显示；阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，且 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。
7. 检测方法的局限性
① 样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关；②样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
③阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果；
④病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
⑤不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
⑥试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
沙门氏菌(SPP)核酸检测试剂盒(PCR法)【注意事项】
① 所有操作严格按照说明书进行；
②试剂盒内各种组分使用前应自然融化，完全混匀并短暂离心；
③反应液应避光保存；
④反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧；
⑤使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服；
⑥样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染；
⑦实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
⑧试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
沙门氏菌(SPP)核酸检测试剂盒(PCR法)【储存条件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融次数不超过 5 次，有效期 12 个月。【适用仪器】
ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列荧光定量 PCR 检测仪。【标本采集】
病死或扑杀动物，取水泡皮及水泡液；待检活动物，取 O/P 液 2~3mL。【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。【产品图片】
【生产企业】
企业名称：上海烜雅生物科技有限公司生产地址：金海公路3265号14幢11546室
上海烜雅生物科技有限公司生产的沙门氏菌(SPP)核酸检测试剂盒(PCR法)质量高，价格低，售后有保证。为您的实验保驾护航。
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本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断。
沙门氏菌(SPP)核酸检测试剂盒(PCR法)新产品：
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| 10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装 ) | XY-TE-1249 | 96 支 |
| 10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装长尖 ) | XY-TE-1251 | 96 支 |
| 10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装已灭菌 ) | XY-TE-1253 | 96 支 |
| 10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装已灭菌长尖 ) | XY-TE-1255 | 96 支 |
| 10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装已灭菌带芯 ) | XY-TE-1257 | 96 支 |
| 10 μL RNase-free 白吸头 ( 盒装已灭菌带芯长尖 ) | XY-TE-1259 | 96 支 |
| 200 μL RNase-free 黄吸头 ( 盒装 ) | XY-TE-1264 | 96 支 |
| 200 μL RNase-free 黄吸头 ( 盒装已灭菌 ) | XY-TE-1265 | 1000 支 |
| 200μLRNase-free 黄吸头 ( 盒装已灭菌带芯 ) | XY-TE-1267 | 96 支 |
| 1000 μL RNase-free 蓝吸头 ( 盒装 ) | XY-TE-1273 | 100 支 |
| 1000 μL RNase-free 蓝吸头 ( 盒装已灭菌 ) | XY-TE-1275 | 100 支 |
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文献和实验PCR法是20世纪80年代中期建立起来的一种体外DNA扩增技术，其基本原理是酶促DNA合成反应，即在DNA模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该方法具有灵敏度高、特异性强、快速的特点，但其对实验环境的要求严格，实验成本较高，有时还有假阳性的现象出现。 1、仪器设备 超净工作台、PCR仪、电泳仪、凝胶成像分析系统、台式离心机、旋涡混悬器等。 2、实验试剂 选用美国Stratagene公司生产的支原体检测试剂盒（内有引物、阳性
DNA的碱基序列决定着基因的特性，DNA序列分析（测序，sequencing）是分子生物学重要的基本技术。无论从基因库中筛选的癌基因或经PCR法扩增的基因，最终均需进行核酸序列分析，可藉以了解基因的精细结构，获得其限制性内切酶图谱，分析基因的突变及对功能的影响，帮助人工俣成基因、设计引物，以及研究肿瘤的分子发病机制等。测序是在高分辨率变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的基础上建立起来的。目前最常用的方法有Maxam-Gilbert的化学降解少和Sanger的双脱氧法等，近年来已有DNA
。 3 以核酸为基础的方法 细胞核酸DNA和RNA是唯一一类可以携带信息的大分子。由于所有的细胞都含有这种分子，可以利用它作为检测的标靶。标靶通常是一个特异性核酸序列，它可通过以补体核酸分子作为探针来检出。与免疫学方法相似，探针也需要加附适当的标记，如放射性同位素、酶或发光的标识物。Fitts等人在食品沙门氏菌检测中引入了第一代DAN—RNA杂交技术，此法应用的探针含有用放射性同位素标记的伤寒沙门氏菌DNA片段，其敏感性高，经大约48h的增菌
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