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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
26
- 英文名:
柱式葡萄球菌 RNAout
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海邦景
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
50 次
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
点击了解更多RNA纯化产品:
柱式葡萄球菌 RNAout50 次规格详细介绍:
操作步骤:
1. 柱式葡萄球菌 RNAout50 次规格匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
实验要点:
1.CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀,因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2.在最适条件下,DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状,很容易一下子就从溶液中钩出。不过,某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质,特别是多糖,使DNA 沉淀呈絮状或胶状,这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3.饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性,但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液,可减轻这两种现象,同时可加入适量的(—氯仿—=25:24:1),的作用是消泡,并使蛋白质层紧密,使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
以下是柱式葡萄球菌 RNAout50 次规格的相关产品:
GST 固定试剂盒1套 MG-132(Proteasome 抑制剂 )1mg
谷胱甘肽 S 转移酶1mg Metformin(LKB1-AMPK 激活剂 )1g
核酸清除剂1.5mL MEQ,(6- 甲氧 -N- )100mg
非变性法蛋白沉淀试剂盒10 次 m7G(5´)ppp(5´)G 帽结构类似物25 OD
微量蛋白沉淀试剂盒50 次 m7G(5´)ppp(5´)A 帽结构类似物25 OD
大提柱式真菌 DNAout4次 盐酸四环素干粉1g
百万碱基级真菌 DNAout10 次 盐酸胍溶液,8M200mL
Southern 级真菌 DNAout10 次 亚氨二乙酸介质10mL
大提柱式酵母 DNAout4次 血液线粒体和核 DNA 双提试剂盒 25 次
柱式动物线粒体 DNAout,PCR 级50 次 血液和 DNA 纯化套装100 次
血清白蛋白清除剂15 次 M15 感受态细胞0.1 mL×10
免疫蛋白清除剂20 次 M13mp18DNA10μg
SDS-PAGE 预制胶12 块 M13mp18DNA10μg
一站式 SDS-PAGE 电泳套装30 次 M13 噬菌体单链基因组 DNAout50 次
SDS-PAGE 浓缩胶配胶液500mL Lyso-Tracker Red( 溶酶体红色荧光探针 )50μL
改良山梨醇麦康凯(CT-SMAC)琼脂 英文名称; Modified Sorbitol Maconkey Agar 规格; 250g
改良山梨醇麦康凯琼脂添加剂 英文名称; Modified Sorbitol MacConkey Agar Additives 规格; 1ml*5支
改良EC肉汤(mEC+n) 英文名称; Modified EC Broth 规格; 250g
半固体琼脂 英文名称; Semi-solid agar 规格; 250g
山梨醇麦康凯琼脂基础(SMAC) 英文名称; Sorbitol Maconkey Agar Base 规格; 250g
四号琼脂 No.4 Agar Base 250g
CC琼脂添加剂 CC Agar Supplement 1ml*5支
纤维二糖-多粘菌素E(CC)琼脂 Cellobiose-polymyxin E Agar 250g
精氨酸双水解酶试验用培养基(AD) Aaginine dehydrolase Medium 5g
嗜盐性试验用胰胨水 Halophilic experimental medium 250g
柱式葡萄球菌 RNAout50 次规格平板计数琼脂(PCA) 国际标准平板计数琼脂,含糖,用于细菌总数的测定(GB、SN标准)用途:用于菌落总数的测定成分(g/L)胰蛋白胨 5.0酵母浸粉 2.5葡萄糖 1.0琼脂 15.0pH值7.0 ± 0.2 25℃用法:称取本品 23.5g,加热搅拌溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装试管或锥形瓶,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
TTC营养琼脂 用于细菌总数测定用于细菌总数测定成分(g/L)蛋白胨 10.0牛肉浸粉 3.0氯化钠 5.0琼脂 15.0TTC 0.01pH值7.5 ± 0.1 25℃用法:称取本品 33.0g,溶解于1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 15 分钟,备用。
营养肉汤(NB) 一般细菌培养,转种,复壮,增菌等(GB标准)用途:用于一般细菌培养、转种、复壮、增菌等。成分(g/L)蛋白胨 10.0牛肉浸粉 3.0氯化钠 5.0pH值7.2 ± 0.2 25℃用法称取本品 18.0g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装三角瓶或试管,121℃高压灭菌 15 分钟备用。
营养琼脂(NA) 细菌计数、不含糖,可作血琼脂基础和传代用(GB标准)用途:用于一般细菌培养、转种、复壮和增菌等成分(g/L)蛋白胨 10.0牛肉粉 3.0氯化钠 5.0琼脂 15.0pH值7.3 ± 0.1 25℃用法:称取本品 33.0g ,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中,分装三角瓶 ,121℃高压灭菌 15分钟,备用。
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文献和实验网络 第二节 葡萄球菌蛋白A(SPA) 葡萄球菌蛋白A(Staphylococal Protein A, SPA)是一种从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质。早在1940年,Vevwey发现在某些金黄色葡萄球菌中,含有一种物质,在双向扩散试验中能与正常人血清形成沉淀。Jensen(1959)也发现类似现象,并将其命名为A抗原。直到1963
结果判断。 β内酰胺酶测定:用Nitrocefin纸片鉴定β内酰胺酶,纸片变红色为阳性。以金黄色葡萄球菌ATC29213为阳性对照,以金黄色葡萄球菌ATCC25923为阴性对照。 触酶稳定性试验:将分离得到的菌株在羊血琼脂平板上连续传代60次后,用3%H2O2和显色触酶试剂做触酶试验。以金黄色葡萄球菌ATCC25923为触酶阳性对照,以粪肠球菌ATCC29212为触酶阴性对照。
前一阵子一直在做双酶切质粒重组,失败了很多次,不过很快改善了实验方法,用2周重组了14个质粒。现就自己的体会,谈一下质粒重组的一些个人经验。 1. 回收PCR产物: 在进行PCR扩增时候,给引物两端设计好酶切位点,一般说来,限制酶的选择非常重要,尽量选择粘端酶切和那些酶切效率高的限制酶。选好酶切位点后,在各个酶的两边加上保护碱基。 双酶切时间及其体系:需要强调的是很多人建议酶切过夜,其实完全没有必要,我一般酶切3个小时,其实1个小时已经足够。应用大体系,如100
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