免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG)

特别提示：包括免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG)
英文名称：SP Kit(Rabbit)
产品货号：QN2715
产品规格：3ml|6ml|18ml|110ml

本试剂盒适合于一抗为兔IgG的免疫组化实验DAB显色。SP法检测试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（PI=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。

试剂盒组成：

组分	3ml	6ml	18ml
封闭液（5%BSA）	3ml	6ml	18ml
3% H2O2	3ml	6ml	18ml
生物素-羊抗兔IgG浓缩液	30μl	60μl	180μl
链酶亲和素-POD浓缩液	30μl	60μl	180μl
稀释液	10ml	20ml	60ml
20×DAB显色液A	0.3ml	0.6ml	1.8ml
20×DAB显色液B	0.3ml	0.6ml	1.8ml

保存：如果长时间不使用，请将所有试剂存放于-20℃，如经常使用，可将封闭液，3%H2O2和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。

操作步骤（以石蜡切片为例）：
1．切片常规脱蜡至水(三次二*苯，三次乙醇)。
2．3%H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3．可选步聚：
  a、热修复抗原，将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液（PH6.0），电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5～10分钟后，反复1～2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1～2次。
  b、酶消化，滴加消化液，37℃10分钟，PBS（pH7.2-7.4）洗涤2～3次。
  c、跳过此步，直接进入下一步。
4．滴加封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，免洗。
5．用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右，也可4℃过夜。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间。）
6．根据用量，用稀释液将生物素-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl生物素-羊抗兔IgG浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素-羊抗兔IgG工作液，20-37℃孵育30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤3次，每次2分钟。
7．根据使用量，用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl链酶亲和素-POD浓缩液混匀，此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液，20-37℃，30分钟。PBS（pH7.2-7.4）洗涤4次，每次5分钟。
8．DAB显色：根据用量，用PBS（pH7.2-7.4）配制，按1mlPBS加入50μl 20×DAB显色液A，加入50μl 20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9．苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。

对于细胞爬片，固定后，PBS漂洗两次，再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟，PBS漂洗两次，3%H2O2处理15分钟；PBS漂洗两次，接上述第4步。
对于冰冻切片，固定后，PBS漂洗两次，接上述第二步。

注意事项：
如果染色背景过高，在SP反应之后，DAB显色之前，用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。

除了免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG),，我公司还供应以下相关产品：



名称：改进型柠檬酸钠抗原修复液(50X)
货号：YT080
规格：100ml
本品是一种在zuì常用的柠檬酸钠抗原修复液的基础上进行优化改进，可以更好地用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚jiǎ醛、jiǎ醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复试剂。

在大多数情况下，改进型柠檬酸钠抗原修复液比普通的柠檬酸钠抗原修复液在相同染色条件下获得的特异性染色信号更强，背景更低。

细胞或组织用多聚jiǎ醛、jiǎ醛或其它醛类试剂固定后，会导致蛋白之间的交联(cross-link)，从而遮蔽样品的抗原位点，导致免疫染色时染色信号减弱，甚至出现一些假阳性染色结果。

本抗原修复液采用了经过改进的柠檬酸钠缓冲液，可以更有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联，充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位，从而更好地改善免疫染色效果。

通常石蜡切片都需进行抗原修复处理，而冰冻切片可以不进行抗原修复处理。抗原修复会大大改善石蜡切片的免疫染色效果，但对于冰冻切片的染色效果很多文献资料表明也有显著改善。特别是当冰冻切片免疫染色效果欠佳时，可以考虑尝试进行抗原修复。从原理上来看，无论冰冻切片还是细胞爬片等，只要是用多聚jiǎ醛、jiǎ醛或其它醛类试剂固定的样品，进行抗原修复都会有效去除蛋白之间的交联，充分暴露抗原表位，从而大大改善免疫染色效果。

一个包装的本产品可以配制成5000毫升抗原修复液(1X)。按照每个片子需要10毫升抗原修复液(1X)计算，一个包装的本产品可以用于500个样品。

注意事项：
1. 抗原修复过程可以使用百奥莱博的染色缸和染色架或邮寄夹进行操作。塑料染色缸、染色架和邮寄夹可以很好地耐受沸水浴，而玻璃染色缸需避免骤冷骤热导致的玻璃破碎。
2. 本抗原修复液使用前必须用重蒸水或Milli-Q水稀释50倍，配制成抗原修复液(1X)。
3. 冻存的本产品需适当加热后才能完全溶解。同时由于本产品含有少量的特殊去垢剂，加热后会产生非常细密的气泡而呈现非常均匀的类似浑浊状，属于正常现象，并非不溶解或产生了沉淀。室温放置较长时间后，例如1-2天，溶液会完全澄清。对于溶解后呈现非常均匀的类似浑浊状的本产品，此时即可取适量稀释后使用。抗原修复过程中加热时也会产生非常细密的气泡而呈现均匀的浑浊状，也属于正常现象，请放心使用。

名称：即用型免疫组化试剂盒(人源一抗)
货号：ZN1829
规格：80T|160T
本试剂盒采用SABC系统，适于人自身抗体的检测。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍，等电点 pI=6.0~6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低。根据研究，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶可以保证SABC具有很高的敏感性。所以SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便等优点。百奥莱博采用独特方法生产的SABC不仅有很强的信号放大作用，而且非常稳定。

试剂盒组成：

组分	规格
5%BSA封闭液	6ml/12ml
生物素标记兔抗人IgG	6ml/12ml
SABC	6ml/12ml

保存条件：4℃可保存一年，应避免冷冻。

石蜡片染色步骤：
1. 石蜡切片，常规脱蜡至水。
2. 3%H2O2去离子水室温孵育5-10分钟，以消除内源性过氧化物酶活性。PBS冲洗，5分钟×3次。
3. 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
4. 封闭。正常兔血清封闭液 37℃孵育 30分钟，甩干，勿洗。
5. 滴加一抗(人IgG)，37℃孵育1-2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5分钟×3次。
6. 滴加生物素标记兔抗人IgG，37℃孵育30 分钟。PBS冲洗，5分钟×3次。
7. 滴加 SABC，37℃孵育30分钟。PBS冲洗，5分钟×3次。
8. 显色：镜下控制反应时间。显色剂可选DAB(ZN1968)或AEC(ZN1963)。自来水充分冲洗。
9. 根据需要进行苏木素(ZN1971)复染，染色时间为0.5-2分钟。脱水，透明。
10. 选用中性树胶，水溶性封片剂(ZN2946)或其他适当的封片剂封片。

建议：
1. 热修复可选用枸橼酸盐缓冲液(ZN1955)、EDTA抗原修复液(ZN1951)、PBS缓冲液、TBS缓冲液(ZN1953)等作为抗原修复液。
2. 酶修复可选用复合修复液(ZN1952)、抗原修复液Ⅰ(ZN1954，与热修复配合使用)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)消化组织。