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- 文献和实验
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冷藏
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长期
- 英文名:
Anti-GST Mouse Monoclonal Antibody Agarose Resin
- 库存:
591
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博主要从事生物试剂的生产和销*(代"售"),产品线涵盖WE0331型抗GST标签琼脂糖介质价格厂家在内的细胞生物学试剂产品,还包括PCR及荧光定量PCR、核酸提取试剂盒类、样本核酸保护试剂、核酸提取、克隆与转化、蛋白纯化、蛋白检测、免疫组化、细胞凋亡与抗体等。
名称:WE0331型抗GST标签琼脂糖介质价格厂家
英文名:Anti-GST Mouse Monoclonal Antibody Agarose Resin
规格:100μl|500μl
编号:WE0331
抗GST标签免疫亲和介质是将抗GST标签的单克隆抗体共价偶联到琼脂糖上,这种琼脂糖能进行免疫沉淀或者免疫共沉淀,能检测含有GST标签的蛋白。
抗体类型:鼠单克隆抗体IgG1
免疫原:人工合成多肽序列
应用范围:IP
欲咨询购买WE0331型抗GST标签琼脂糖介质价格厂家,请致电北京百奥莱博科技有限公司,为您提供最全面周到的产品服务,除此之外,我公司正在促销以下产品:
·一步法RT-PCR试剂盒
编号:WE0129
英文名称:UltraRT One Step RT-PCR Kit
规格:100次
本试剂盒是专为一步法RT-PCR实验研制,逆转录和PCR在同一反应体系中进行,反应过程中无需添加试剂,无需打开管盖,在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。本试剂盒包括全新高效逆转录酶、快速热启动DNA聚合酶,同时包含适用于逆转录和PCR扩增的反应缓冲液和实验中所必需的其它组分。UltraRT逆转录酶RNase H活性缺失,减少了逆转录反应中RNA的降解。该逆转酶逆转录效率高,可对少量RNA模板进行良好的逆转录反应。PCR反应使用的快速热启动DNA聚合酶具有扩增效率高、特异性强、延伸速度快的优良性能。独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。使用本试剂盒扩增得到的目的产物3"端附有一个″A″碱基,可直接用于T/A克隆。
试剂盒组成:
| 组份 | 100次 |
| UltraRT OneStep EnzymeMix | 50μl |
| 2×UltraRT OneStep Buffer | 1.4ml |
| RNase-Free Water | 1.5ml |
注意事项:
1、在操作过程中应避免RNase污染,防止RNA降解或实验中的交叉污染,建议在专门的区域进行RNA操作,使用专门的仪器和耗材,操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。
2、实验尽量使用一次性塑料器皿,若使用玻璃器皿,应使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时,并在120℃下高压灭菌30分钟后使用,或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3、本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃,避免反复冻融。
4、本试剂盒必须使用特异性引物,引物的选择可根据具体实验来选择,引物设计的好坏直接影响到RT-PCR 反应的结果,设计引物时需考虑GC含量,引物长度,引物位置,PCR产物的二级结构等因素,建议采用专业的引物设计软件来设计。
使用方法:
1、将RNA模板、引物、OneStep RT-PCR Buffer、UltraRT OneStep RT-PCR EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系:
| 试剂 | 25μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×UltraRT OneStep Buffer | 12.5μl | 1× |
| Forward Primer,10μM | 1μl | 0.4μM |
| Reverse Primer,10μM | 1μl | 0.4μM |
| UltraRT OneStep EnzymeMix | 0.5μl | |
| RNA Template | Xμl | 1 pg–1μg |
| RNase-Free Water | up to 25μl |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
3、涡旋震荡混匀,短暂离心,将溶液收集到管底。
4、将热循环仪预热到45℃,将PCR管置于热循环仪中,进行RT-PCR反应。
反应条件:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 反转录 | 45℃ | 30 min | |
| PCR预变性 | 95℃ | 2 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 30-40 个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 30 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意:
1)一般PCR实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,退火时间一般为20-30秒,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间根据扩增的片段大小设定,本产品中包含的DNA Polymerase扩增效率为1 kb/30s。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。循环次数太少,扩增量不足;循环次数多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数。
5、反应结束后取5μl反应产物,加入适量上样缓冲液后进行电泳检测结果。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
WE0331型抗GST标签琼脂糖介质价格厂家关键词:抗GST标签琼脂糖介质,Anti-GST Mouse Monoclonal Antibody Agarose Resin,WE0331
·游离DNA样本保存管(5ml)
编号:WE0396
英文名称:Cell-Free DNA Storage Tube(5ml)
规格:5ml×5支|5ml×50支
游离DNA保存管可直接用于血样的采集与运输,并稳定其中的游离DNA(Cell-Free DNA),是由EDTA抗凝剂和特殊的保护剂组成,能够有效抑制血浆中的核酸酶,并避免血液有核细胞中基因组DNA的释放。该产品适用于无创产前筛查与一些疾病的早期诊断相关的研究。
游离DNA保存管中血液样本可按大多数商业化试剂盒进行游离DNA提取,提取后的游离DNA可应用于下游的检测与分析。同时,该产品也能够用于血液有核细胞中的基因组DNA的保存。
·Bradford蛋白定量试剂盒
编号:WE0275
英文名称:Ultra Bradford Protein Assay Kit
规格:800次微孔板(100管次)
Bradford 法是最简单和快速的比色蛋白定量方法。 这一方法基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后, 产生蓝色化合物,反应迅速而稳定。反应化合物在465-595 nm处有最大的光吸收值,化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系,因此可通过检测595 nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。本产品将传统的Bradford方法进行了改良,最大限度的加大蛋白定量的线性范围,变异性小于普通考马斯亮蓝染色法,灵敏度范围为100-1,500μg/ml。使用本产品反应迅速,颜色产物1小时内保持稳定。本试剂盒适用于多种缓冲液系统,不受金属离子、还原剂和螯合剂的干扰。
试剂盒组成:
| 组成 | 规格 |
| Bradford Protein Assay Reagent | 2×100ml |
| BSA Standard Solution(2mg/ml) | 2ml |
注意事项:
1、BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)。
2、本试剂盒不适合含有去污剂的蛋白定量,具体干扰物质(具体见附表1),可采用BCA蛋白定量试剂盒(WE0276)或其他蛋白定量产品。
3、所测蛋白分子量必须大于3 kD。
使用方法:
1、稀释BSA标准品:用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。
| 管号 | 稀释液用量(μl) | BSA标准品用量(μl) | BSA标准品最终浓度(μg/ml) |
| A | 0 | 100 | 2000 |
| B | 50 | 150 | 1500 |
| C | 200 | 200 | 1000 |
| D | 200 | 200(从C管中取) | 500 |
| E | 200 | 200(从D管中取) | 250 |
| F | 200 | 200(从E管中取) | 125 |
| G | 200 | 0 | 0(空白) |
2、试管检测(检测范围:100-1500μg/ml)
1)按上表稀释标准品,将30μl稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。
2)取干净的试管,分别加入30μl待测蛋白样品(原液或稀释液),并作好标记,推荐每个测定做2-3个平行反应。
3)向步骤1)和步骤2)的试管中各加入1.5ml Bradford Protein Assay Reagent,充分混匀,室温放置10分钟。
4)用分光光度计测定595 nm处的吸光值。
5)绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。
注意:数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线,可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
6)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。
3、微孔检测(检测范围:100-1500μg/ml)
1)将按表1稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各5μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。
2)每孔加入250μl Bradford Protein Assay Reagent,充分混匀,盖上96孔板盖,室温放置10分钟。
3)用酶标仪测定595 nm处的吸光值。
4)绘制标准曲线,计算样品中的蛋白浓度。
注意:数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线,可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
5)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。
附表1. 干扰物质表
| 化合物 | 耐受浓度 |
| 缓冲液 | |
| 乙酸盐 | 0.6M |
| 甘*酸 | 0.1M |
| HEPES | 0.1M |
| MES | 0.7M |
| MOPS | 0.2M |
| Na+-柠檬酸 | 50mM |
| PIPES | 500mM |
| 磷酸*/磷酸* | 1M |
| 乙酸* | 0.6M |
| Tris | 2M |
| 盐类 | |
| 硫*(代"酸")铵 | 1M |
| NaCl | 1M |
| 尿素 | 6M |
| 极性化合物 | |
| 甘油 | 99% |
| 还原剂 | |
| β-巯基乙醇 | 1M |
| DTT | 1M |
| 去垢剂和变性剂 | |
| Brij35 | 干扰 |
| 脱氧胆酸纳 | 0.25% |
| CHAPS | 1% |
| NP-40 | 干扰 |
| 辛葡糖 | 2% |
| SDS | 0.1% |
| Tween-20 | 干扰 |
| Triton X-100 | 0.1% |
| 糖类 | |
| 蔗糖 | 1mM |
| 螯合剂 | |
| EDTA | 100mM |
| EGTA | 50mM |
| 其他 | |
| HCl | 0.1M |
| NaOH | 0.1M |
| NAD | 1mM |
| * | 5% |
储存条件:2~8℃
WE0331型抗GST标签琼脂糖介质价格厂家关键词:抗GST标签琼脂糖介质,Anti-GST Mouse Monoclonal Antibody Agarose Resin,WE0331
·高纯游离DNA中量提取试剂盒(负压法)
编号:WE0189
英文名称:CWhipro Circulating Nucleic Acid Midi Extraction Kit
规格:10次|50次
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血清、血浆、羊水、尿液等无细胞体液中提取游离DNA。本试剂盒采用可以特异性结合核酸的吸附柱和独特的缓冲液系统,样品裂解后,游离DNA在高盐条件下与硅胶膜结合,在低盐、高pH值时游离DNA从硅胶膜上洗脱下来。本试剂盒使用负压法,同时配备延伸管,可处理多达5ml样本,纯化的DNA产量高、质量好,最大限度去除蛋白、色素、脂类及其他抑制性杂质污染。纯化得到的游离DNA质量稳定、可靠,可直接用于PCR、荧光定量PCR和二代测序等分子生物学实验。
试剂盒组成:
| 组份 | 10次 | 50次 |
| Buffer CL | 45ml | 220ml |
| Buffer CB(浓缩液) | 60ml | 300ml |
| Buffer GTL | 15ml | 60ml |
| Buffer GW1(浓缩液) | 3ml | 13ml |
| Buffer GW2(浓缩液) | 3ml | 15ml |
| Buffer EBL | 2ml | 10ml |
| 蛋白酶K | 100 mg | 3×180 mg |
| 蛋白酶K 储存液 | 5ml | 30ml |
| 吸附柱DG及收集管 | 10套 | 50套 |
| 延伸管(20ml) | 10个 | 50个 |
| 连接管 | 10个 | 50个 |
| 离心管(L-1.5 m l) | 10个 | 50个 |
保存条件:吸附柱DG置于2~8℃,其他组分室温(15~30℃)
产品特点:
1、适合大体积样本:试剂盒使用负压法,配备延伸管,配套使用负压装置可将样品处理量提高至5ml。
2、提取得率高:使用高效微量吸附柱结合目的片段,有效提升核酸的回收率,洗脱体积可在10-150μl之间灵活变化,可浓缩低浓度核酸。
3、纯度高:经纯化和浓缩的游离DNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质,可即用于下游各种应用,包括PCR、荧光定量PCR、二代测序等。
自备试剂:无水乙醇、异丙醇
实验前准备及重要注意事项/strong>:
1、向每管蛋白酶K *(代"粉")末中加入指定用量(10次加5ml/50次每瓶加9ml)的蛋白酶K 储存液,使其完全溶解后-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置,避免反复冻融,以免影响其活性。其它组分可以在干燥、室温(15~30℃)环境下稳定保存一年。如需保存更长时间,可置于2~8℃。
2、样品应避免反复冻融,否则会导致DNA提取量下降。
3、本试剂盒最多可以从5ml血清血浆、4ml尿液中提取cfDNA。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer CB中加入异丙醇,混合均匀,并在试剂瓶标签上做好标记。
5、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇,混合均匀,并在试剂瓶标签上做好标记。
6、使用前请检查Buffer CL、Buffer CB是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将Buffer CL、Buffer CB于56℃水浴孵育重新溶解,混匀后使用。
7、实验开始前将水浴锅预热至60℃。
8、可将洗脱缓冲液Buffer EBL预热至60℃。
9、负压装置。
操作步骤(血清、血浆样本1-5ml):
1、样品处理:向离心管(自备)中加入1ml血清/血浆样本,若样本不足1ml,加入PBS溶液补至1ml体积。
注意:当样品量超过1ml时,请等比例增加蛋白酶K 、Buffer CL和Buffer CB试剂用量,具体
2、向以上溶液中加入100μl 蛋白酶K ,混匀。
3、加入800μl Buffer CL,剧烈震荡至少30秒。
4、60℃孵育30分钟,其间颠倒混匀数次。
5、加入1800μl Buffer CB(使用前检查是否加入异丙醇),颠倒混匀10次或剧烈震荡15-30秒。
6、冰浴5分钟。
7、正确连接负压装置,将连接管插到负压装置的插口上。
8、将吸附柱插入到连接管上。
9、将延伸管插入开盖的吸附柱中。
注意: 确保连接管、吸附柱和延伸管连接稳固,防止发生漏液。
10、将冰浴后的混合溶液全部加入延伸管中,开启并调节负压至-900~-800 mbar,缓慢吸走管中溶液。待溶液完全吸走,关闭负压开关,当压力恢复至0 mbar时,小心移去延伸管。
11、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇), 开启并调节负压至-900~-800 mbar,待溶液完全吸走,关闭负压开关。
12、向吸附柱中加入750μl Buffer GW2(使用前检查是否加入无水乙醇),开启并调节负压至-900~-800 mbar,待溶液完全吸走,关闭负压开关。
13、向吸附柱中加入750μl无水乙醇,开启并调节负压至-800~-900 mbar,待溶液完全吸走,关闭负压开关。
14、当压力恢复至0 mbar时,将吸附柱取下,置于新的收集管中,12000rpm离心3分钟,倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟,以彻底晾干。
注意:这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除,乙醇的残留会影响后续的酶促反应。
15、将吸附柱置于新的1.5ml离心管中,向吸附柱的中间部位悬空加入20-150μl Buffer EBL,室温放置3分钟,12000rpm离心1分钟,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
附表1:不同血清/血浆样本量推荐加入试剂量
| 加入物 | 加入量(ml) | ||||
| 样本 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 蛋白酶K | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 |
| Buffer CL | 0.8 | 1.6 | 2.4 | 3.2 | 4 |
| Buffer CB | 1.8 | 3.6 | 5.4 | 7.2 | 9 |
储存条件:室温(15~30℃)。
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风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验[资源][原创] 蛋白标签纯化技术——CBP(钙调蛋白结合肽)
如Western blotte。CBP标签层析纯化解决方案 钙调蛋白—6组氨酸—镍离子熬合介质 CBP钙调蛋白结合肽可特异性的与钙调蛋白结合,我们构建一种在N末端含有6个组氨酸标签的重组钙调蛋白,这种6个组氨酸融合钙调蛋白可与镍离子鏊合柱特意性结合,从而形成了一种能够特意性纯化CBP标签的亲合层析体系。钙调蛋白—琼脂糖介质直接与琼脂糖结合的钙调蛋白分离介质,保存于0.5 M NaCl containing 0.02% thimerosal中,1mg/ml,4% beaded agarose,2-8°C。
。 绝招四:纯化实验中常用的亲和标签汇总 Cytiva 提供多种亲和标签纯化产品,可用于纯化 His、GST、Strep(II)/ Twin-Strep、MBP 这些标签融合的重组蛋白。不同的标签蛋白在分子量、促溶性、结合特异性等方面各有特点,个性鲜明。 图 2:Cytiva 产品可用于纯化的主要亲和标签的性质对比 绝招五:纯化得到的组分中没有或很少目的 His 标签蛋白的主要原因分析 若目的 His 标签蛋白正常表达(使用
的,但是这结果是不是假阳性呢?还得做个阴性对照。阴性对照如何设置呢?考虑到整个实验体系会出现 beads、抗X抗体、诱饵蛋白 X、靶蛋白 Y(co-IP): 可能出现的假阳性来源 需要的阴性对照 抗 X 抗体结合非特异的蛋白 与 IP 一抗种属亚型相同的免疫球蛋白(比如,抗 X 抗体是 Mouse IgG,阴性对照可使用 Mouse 免疫球蛋白) beads 对蛋白的非特异结合* 同上,此外还可进行 Pre clear,IP 正式实验前排除非特异结合蛋白。如果使用琼脂糖
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