GST标签纯化树脂

特别提示：包括GST标签纯化树脂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：GST标签纯化树脂
英文名称：GST Resin
产品货号：QN4045
产品规格：5ml|10ml

pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。GSTs是一类以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对GST及其融合蛋白的纯化效率很高。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。树脂用3mol/L NaCl的缓冲液再生。谷胱甘肽琼脂糖对GST融合蛋白的结合能力很强（每毫升柱床体积的树脂能结合8毫克融合蛋白）。

别名：谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B
粒度：45-165µm
流速：75cm/h          
工作pH：4～10
耐压：0.3Mpa
载量：＞5mg谷胱甘肽S-转移酶
储存条件：4℃保存，有效期至少一年。

使用说明：
谷胱甘肽树脂的处理：
1．轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。
2．取部分匀浆放入15mL聚丙*管（每100mL细菌培养物大约需要2mL匀浆）。
3．4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
4．在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃ 500g离心5分钟，小心去掉上清。
5．每毫升树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。制备细胞抽提物：
6．每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mL PBS缓冲液中。
7．加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL,冰上放置30分钟。
8．用针筒将10mL浓度为0.2%的TritonX-100强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。加入DNase和RNase至终浓度5μg/mL,4℃振动温育10分钟，4℃ 3000 g离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。纯化融合蛋白：
9．细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2mL树脂，于室温轻摇30min。
10．混合物于4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙*酰胺凝胶电泳。
11．沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋白。
12．4℃以500g离心5分钟，小心去掉上清并留样少许进行SDS聚丙*酰胺凝胶电泳。
13．重复步骤11和12两次。
14．结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或Xa因子切割，释放靶蛋白。
用谷胱甘肽洗脱融合蛋白：
15．沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动10min，洗脱树脂上结合的蛋白。
16．4℃以500g离心5分钟，上清（含洗脱的融合蛋白）移至新管中。
17．重复步骤a和b两次，合并3次上清。蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶蛋白：
18．在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或Xa因子（根据融合蛋白中的位点选择），每mL树脂加入50单位溶于1mLPBS的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡2—16小时。用小规模实验确定精确时间。
19．4℃以500g离心5分钟，上清小心移至新管中。（GST仍结合在树脂上，而靶蛋白在上清中，蛋白酶也在上清中，仍需要分离）
20．10% SDS聚丙*酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。试剂配制：谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L还原型谷胱甘肽，50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)

除了GST标签纯化树脂,谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B，我公司还供应以下相关产品：



名称：DEAE-葡聚糖凝胶A-25
货号：QN3990
规格：25g|100g|500g

名称：聚酰胺(60～100目)
货号：QN3993
规格：500g

名称：钠型732阳离子交换树脂
货号：QN4049
规格：500g
钠型732阳离子交换树脂的使用方法：
1．树脂预处理。
  732树脂是强酸性苯*烯系阳离子交换树脂，新树脂在使用前，需进行予处理。将准备装柱使用的新树脂，先用70-80℃的热水（清洁的自来水即可）反复清洗。开始浸洗时，每隔约15分钟换水一次，浸洗时要不时搅动，换水4-5次后，可隔约30分钟换水一次，总共换水7-8次，浸洗至浸洗水不带褐色，泡沫很少时为止。也可用10％氯化钠溶液浸泡树脂24小时，然后用清水冲洗至洗水无色为止。
2．酸处理。
  酸处理zuì好在交换柱中进行，先用湿法装柱法将树脂放入柱内。用1N盐酸缓慢流过树脂，用量约为强酸阳树脂体积的2-3倍，每小时1.5倍床层体积流过。酸进完后，再浸泡1小时左右。然后用水冲洗，至出水PH为5左右为止。
3．碱处理。
  用1N NaOH流过树脂，用量及流速与1相同。碱进完后，同样再浸泡1小时左右。然后用水冲洗，至出水PH为9左右为止。
4．转型。
  若需用H型，则用1N盐酸或硫酸，将树脂转成H型，用量为树脂体积的3-5倍，流速与1相同。酸流完后，用去离子水冲洗至出水PH值为6以上时，即可投入使用。
  若用Na型，则不必转型，于碱处理完成后，即可投入使用。但冲洗树脂用水需用去离子水。
5．再生。
  再生前，先将树脂反洗至出水无色透明。
  H型树脂用1N HCL、Na型树脂用1N NaoH（也可用8％的NaCL溶液）过柱，用量为柱脂体积的2－3倍，流速为每小时1倍床层体积。
  再生液过完后，用去离子水洗柱至出水至中性，即可再次投入使用。

储存条件：RT

名称：辛基-琼脂糖凝胶H.P.
货号：QN4072
规格：25ml
储存条件：4～28℃

名称：丁基-琼脂糖凝胶4B
货号：QN4073
规格：25ml
丁基-琼脂糖凝胶4B是将丁基键合在琼脂糖凝胶4B上形成的一种可利用疏水相互作用来实现目标产品纯化分离的疏水类介质。用于生物大分子和乙肝疫苗的纯化分离。本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

理化指标：

项目	指标
配基	丁基
基质	4%交联琼脂糖凝胶
形状	球形
粒径	45～165μm
配基密度	6～14μmol/ml介质
zuì高流速(25℃)	100KPa下50cm/h*
耐压	0.1MPa
工作温度	4～40℃
pH适用范围	4～8（短时间，在位清洗）； 4～8（长时间）
化学稳定性	以下溶液中稳定： pH4.0～8.0中稳定； 0.1% triton水溶液和1% MOPS溶液中稳定； 5%jiǎ醛中基本稳定

*柱子：内径16mm、柱长10cm，柱床高5cm，25℃，流动相为0.1mol/L NaCl。

包装：产品以无菌试剂瓶密封包装，外贴标签，注明“品名、体积、颗粒大小、应用、生产单位”等内容。所选用的包装应有利于保证产品质量、方便运输和贮存。
运输：运输中应避免日晒、雨淋、重压，严禁与有毒、有害物品混运。
保存条件：产品应密封贮存在4～30℃（保存溶液为20%乙醇+0.1M醋酸钠），通风、干燥、清洁的地方，不能冷冻，保质期5年，用过的柱子贮存在4℃（20%乙醇）。

使用过程：
1．装柱
① 让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。
② 根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。
③ 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。
④ 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
⑤ 打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。用2~3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。
2．平衡
  让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如0.02～0.05mol/L的PBS加1～2.5mol/L(NH₄)₂SO₄等。
3．上样
① 样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心和过滤后上样。
② 一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。
③ 介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。盐浓度大、温度高或样品组分疏水性强，介质对组分吸附牢。
4．洗脱
  疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或有机溶剂可加强洗脱。zuì常用的洗脱液是低盐浓度缓冲液，如0.02~0.05mol/L的PBS。
5．再生
  一般用低盐浓度的缓冲液洗，洗10倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
6．在位清洗
① 对于以离子键结合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。
② 对沉淀蛋白、对以疏水性结合的蛋白或脂类，可用1M NaOH去除。
③ 对强疏水性结合的蛋白、脂类等，用4~10倍柱体积的70%乙醇或30%异bǐng醇清洗，但要注意有机溶剂的浓度以梯度的方式逐渐增加，否则容易产生气泡。
  清洗完毕后，用至少3倍缓冲液平衡柱子。
7．注意
  在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。
8．去热源
  用0.5M的氢氧化*清洗柱子5～6小时或用0.1M的氢氧化*24小时。或用以下方法步骤去除：
① 2倍柱体积的70%乙醇；
② 2倍柱体积50mM Tris-Hcl pH7.5；
③ 1倍柱体积4M尿素；
④ 3倍柱体积的Tris缓冲液+0.1M Nacl；
  上缓冲液都在无热源的双蒸水中配制。
9．消毒用0.5～1M NaOH室温下洗8～10倍柱体积，初始缓冲液平衡柱子。

特别注意：上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。