细胞凋亡整体解决方案

概念

细胞凋亡，也称为程序性细胞死亡，是机体为维持内稳态、正常发育，清除冗余，损坏或感染的细胞的一种主动生理过程，也是一种防御机制。

特征

细胞凋亡发生时会有形态和生化改变的显著特征。形态变化主要体现在细胞皱缩，体积变小，细胞质膜起泡，到凋亡晚期时出现凋亡小体。凋亡小体包裹着细胞器和细胞核碎片，它们被巨噬细胞、薄壁细胞所吞噬，被吞噬溶酶体所降解，因而避免炎症反应的发生。生化改变的典型特征是染色体的固缩和DNA片段化。核小体间连接区的双链DNA片段化后其大小均为寡核小体DNA长度(180-200bp)的整倍数，因而在琼脂糖凝胶电脉中呈现规则的“梯子”形(DNA ladder)。“DNA ladder”的出现可作为判别细胞凋亡的特异性指标，但若未检出“DNA ladder”，亦不能排除凋亡的可能。



 

凋亡途径

细胞凋亡可以在不同的刺激下诱导发生，在哺乳动物中，细胞凋亡信号通路主要分为4类：

• 线粒体通路：主要由多种压力信号，例如，DNA化学损伤，UV辐射，生长因子缺乏等引起，也称内源细胞凋亡通路；
• 死亡受体途径：由细胞表面的受体信号所介导，也称外源细胞凋亡通路；
• T细胞参与的细胞死亡途径：此通路中，颗粒酶A或颗粒酶B均可诱导凋亡；
• 内质网通路：当内质网的蛋白折叠功能受到影响时，未折叠蛋白反应（UPR）将会被激活，继而引发凋亡。

这四条信号通路既相互独立又互相交叉，其核心的执行者都是一类蛋白：含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）。

          
 

细胞凋亡检测方法

1.检测Caspase切割法
2.检测Bcl-2家族蛋白表达
3.检测p53蛋白表达
4.检测细胞色素c的释放
5.Annexin V和PI双染法检测细胞凋亡
6.TUNEL法检测细胞凋亡

通常情况下，需要联合使用多种检测手段增加说服力，如通过WB检测Caspase的自切割，对PARP的切割，Bcl家族蛋白的变化，通过流式检测细胞水平上的凋亡情况，通过TUNEL检测动物水平上的凋亡情况。