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- 把PCR片段与一个具有3-T突出的载体DNA连接起来的方法。因为PCR反应中所适用的聚合酶具有末端转移的活性，通常在3’端加上A。例如：Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，PCR反应时在每条PCR扩增产物的3'端自动添加一个3’A突出端。只有用经过特殊处理的具有3’T突出末端的DNA片断才能通过T/A配对进行连接。通过PCR的方法扩增目的基因片断的过程中，由于往往不清楚目的基因的DNA序列，获得的目的片断通常需要通过TA克隆的方法，重组到T-载体中，通过序列测定清楚DNA序。
- 天津
- 2026年06月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
天津科斯莫生物科技有限公司
- 服务名称：
TA克隆
原理：
把PCR片段与一个具有3-T突出的载体DNA连接起来的方法。因为PCR反应中所适用的聚合酶具有末端转移的活性，通常在3’端加上A。例如：Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，PCR反应时在每条PCR扩增产物的3'端自动添加一个3’A突出端。只有用经过特殊处理的具有3’T突出末端的DNA片断才能通过T/A配对进行连接。通过PCR的方法扩增目的基因片断的过程中，由于往往不清楚目的基因的DNA序列，获得的目的片断通常需要通过TA克隆的方法，重组到T-载体中，通过序列测定清楚DNA序。
服务流程：
1. 检测样品DNA片段长度和浓度。
2. 加“A”尾巴（若PCR产物已有“A”尾巴则无需此步骤）
3. PCR产物与载体连接
4. 转化并筛选重组子
5. 重组子测序
6. 测序结果分析
7. 重组质粒纯化
相关要求：
客户提供待测基因详细信息。
最终结果：
1. 纯化后重组质粒；
2. 具体试验流程(包括：实验步骤；主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号；试剂厂家、批号))；
3. 原始数据及相关结果分析。
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文献和实验PCR产物的TA克隆 (DNA的胶回收和连接) 【实验目的】 1.掌握DNA回收和连接的基本原理。 2.学习和掌握PCR产物的T-vector克隆。 【实验
快速TA克隆的突破T载体是TA克隆载体的简称，就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。目前市场上常见的T载体，根据连接方法可以分成两种：方法1、以T4连接酶进行连接的方法，这种方法的载体有promega、takara；可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平，转化子比较多，阳性率也不错，唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高，要达到较好的连接效率，一般要过夜连接。国内很多公司模仿这种方法制作T载体，不仅连接时间也很长，而且做不到
现象可能原因解决方案 转化后无菌落生长 感受态细胞已经失效用pUC18质粒进行转化，确认细胞的感受态效率。1ng pUC18质粒至少应得到1000个以上的转化子。如有问题，重新制备感受态细胞。 平板所用抗性不对pBS-T载体为amp抗性，工作浓度 100 ug/ml 连接中使用了不恰当的vector:insert 比例估计PCR产物的量，将vector:insert比例限制在3:1到 1:5的范围内。对于极小的PCR产物进行克隆，很可能因为PCR产物严重过量，导致无菌落或菌落极少。 白色
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