Ar.Qual

Ar.Qual

---

产品规格 （CAT#: KL21060）
Ar.Qual：                                                                      100μl/支
pCAMBIA2301（control vector，10ng/μl )                       10μl
保存条件(保质期)：                                            -80℃（12个月）

基因型

Agrobacterium rhizogenes (str^R,Cam^R ) Ar Qual Ri (agropine type)


产品说明
发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大
多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。Ar.Qual发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒，具有
广泛的宿主范围（玉米，烟草，番茄，柑橘等），同时具有链霉素，氯霉素抗性。本公司生产的Ar.Qual化学
转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（卡那霉素抗性）检测，转化效率>10⁴ cfu/μg DNA。


常规操作方法
1.取-80℃保存的Ar qual发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。

2.每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA（转化效率较高，第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量）
，用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀，依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、
冰浴5分钟。
3. 冰浴中拿出放室温，加入700μl 无抗生素的TY液体培养基，于28℃振荡培养2小时。
4. 6000 rpm 离心一分钟收菌，留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上，
倒置放于28℃培养箱培养2-3 天


 
● 农杆菌相关抗生素配方：
 

抗生素	配方	原液	工作液
羧苄青霉素 (carb)	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	50 mg/ml	50 μg/ml
硫酸卡那霉素(kan)	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	50 mg/ml	50 μg/ml
链霉素 (strep)	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	10 mg/ml	50 μg/ml
利福平 (rif)	DMSO溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	10 mg/ml	20 μg/ml
庆大霉素 (gent)	双蒸水溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	20 mg/ml	40 μg/ml
氯霉素（cam）	无水乙醇溶解，0.22 μm滤膜过滤除菌	34 mg/ml	34 ug/ml

常用农杆菌抗性： (R：抗；S：敏感。)

农杆菌菌株	羧苄青霉素(carb)	链霉素(strep)	利福平(rif)	氯霉素(gent)	硫酸卡那霉素(kan)
Ar.A4	S	S	S	S	R
MSU440	S	R	S	S	S
Ar.Qual	S	R	S	R	S
C58C1	S	R	R	S	S
ATCC15834	S	S	S	S	S
K599	S	R	S	S	S
Ar.1193	R	R	R	S	S

● TY配方（1L）：
Tryptone                5g
Yeast extract          3g
补水到1L体积，完全溶解后，121度、20分钟高温灭菌
配制1M的氯化钙水溶液，121度、20分钟高温灭菌
每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。
若配制TY固体培养基，则加入15g 琼脂粉。


注意事项
1. 加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转
化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2. 混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀，务必使质粒快速、均匀分散开，
与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3. 平板上阳性克隆密度过大时，由于营养不足，阳性克隆生长变慢，菌落变小，为了获
得大的菌落，应减少质粒用量或降低涂板的菌量。
4.  Ar.Qual具有链霉素、氯霉素抗性，不可用于具有链霉素抗性或氯霉素抗性质粒的转化。