Western Blot采用的是SDS-PAGE电泳分离蛋白质混合物,经过SDS-PAGE分离的蛋白质被到转移到固相支撑物(NC膜,PVDF膜等)上后,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持膜上蛋白质或多肽的抗原性质不变,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与其对应的抗体发生免疫反应,一抗再与酶标记的二抗体起反应,经过底物显色以检测特异蛋白质表达水平。 由于Western blot技术服务具有简便,快捷等特点,所以目前该技术也被广泛应用于蛋白质表达水平的检测。
Western Blot采用的是SDS-PAGE电泳分离蛋白质混合物,经过SDS-PAGE分离的蛋白质被到转移到固相支撑物(NC膜,PVDF膜等)上后,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持膜上蛋白质或多肽的抗原性质不变,以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与其对应的抗体发生免疫反应,一抗再与酶标记的二抗体起反应,经过底物显色以检测特异蛋白质表达水平。
8、显影(ECL法):将A、B两种底物按比例稀释混合均匀后滴在膜上,置于压片盒中,迅速盖上胶片,关闭胶盒进行曝光,曝光一定时间后取出胶片,浸入显影液中显影,直到出现清晰的蛋白质条带,清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影,清水冲净晾干,标定Marker,扫描胶片和Western blot 图片分析。