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- Western Blot采用的是SDS-PAGE电泳分离蛋白质混合物，经过SDS-PAGE分离的蛋白质被到转移到固相支撑物（NC膜，PVDF膜等）上后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持膜上蛋白质或多肽的抗原性质不变，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与其对应的抗体发生免疫反应，一抗再与酶标记的二抗体起反应，经过底物显色以检测特异蛋白质表达水平。 由于Western blot技术服务具有简便，快捷等特点，所以目前该技术也被广泛应用于蛋白质表达水平的检测。
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- 2026年01月17日
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- 提供商：
辉骏生物
- 服务名称：
Western blot实验
Western Blot实验概述—辉骏生物
Western Blot采用的是SDS-PAGE电泳分离蛋白质混合物，经过SDS-PAGE分离的蛋白质被到转移到固相支撑物（NC膜，PVDF膜等）上后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持膜上蛋白质或多肽的抗原性质不变，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与其对应的抗体发生免疫反应，一抗再与酶标记的二抗体起反应，经过底物显色以检测特异蛋白质表达水平。
由于Western blot技术服务具有简便，快捷等特点，所以目前该技术也被广泛应用于蛋白质表达水平的检测。
WB技术服务内容—辉骏生物
WB送样须知—辉骏生物
为了保证Western blot技术服务能顺利进行，样品寄送需满足以下要求：
顾客提供：组织、细胞、蛋白质溶液等；一抗（如果公司抗体库里没有）。
运输要求：干冰或液氮包装寄送，广州本地客户可上门收样。
注：样本应避免各类污染和反复冻融。
WB实验服务报告内容—辉骏生物
1、Western blot蛋白质浓度及电泳上样量；
2、原始胶片、电子图片及图片分析结果；
3、Western blot完整的实验报告,包括实验步骤、使用仪器和试剂等。
WB实验案例—辉骏生物
WB实验服务周期及收费标准—辉骏生物
请咨询辉骏生物电话：400 699 1663
WB服务承诺—辉骏生物
利用内参精确定量，并提供清晰、客观的western结果。
附:Western blot实验步骤—辉骏生物
1、Western blot蛋白质提取：根据实验目的的不同选择不同的裂解液，如RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液，同时根据蛋白质提取组分的不同选择不同的方法，如提取核蛋白，细胞质蛋白，膜蛋白等。
2、蛋白定量，根据蛋白质的提取条件不同，可采取不同的定量方法，如bradford法、BCA法等。
3、电泳，依据需要检测蛋白的分子量选取分离胶的浓度，分别配置分离胶和积成胶，凝胶凝固后进行蛋白质上样和电泳。
4、转膜，可采取半干法和湿法转移，当采取半干法转膜时需防止短路：从下到上的顺序：滤纸/PVDF膜/凝胶/滤纸/阴极（bio-rad转膜仪)。
5、封闭：5%脱脂奶粉或5% BSA封闭过夜或室温1小时,孵育时间可根据实验需要进行改变。
6、一抗孵育，5%脱脂奶粉稀释一抗到合适的浓度，与膜室温孵育1小时或4度过夜，孵育时间可参考抗体说明书，并加以优化，一抗孵育后TBST洗膜3次，每次5分钟。
7、二抗孵育，5%脱脂奶粉稀释二抗到合适的浓度，与膜室温孵育1小时，TBST洗膜3次，每次5分钟。
8、显影(ECL法）：将A、B两种底物按比例稀释混合均匀后滴在膜上，置于压片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒进行曝光，曝光一定时间后取出胶片，浸入显影液中显影，直到出现清晰的蛋白质条带，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定Marker，扫描胶片和Western blot 图片分析。
预计交付周期：10日
广州辉骏生物科技股份有限公司是一家由在生物医药领域具有资深科研资历人才组建的创新型科技企业，致力于为生物医药企业、高校、科研机构、医院及个人提供高品质的技术服务。公司拥有完善的分子生物，细胞生物，蛋白免疫，质谱分析平台，尤其擅长于蛋白质组学与代谢组学，蛋白-蛋白，蛋白-核酸及核酸-核酸相互作用的筛选和验证，及以此为基础的整体课题服务。
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文献和实验样本准备 蛋白提取 所需仪器：匀浆器、RIPA 裂解液、PMSF（蛋白酶抑制剂）、磷酸酶抑制剂、剪刀、镊子，消毒酒精棉、PBS、移液器、离心机。 裂解液配制——RIPA 裂解液：PMSF=100：1。 1） 组织处理：首先用酒精棉消毒剪刀和镊子，取适量的组织于匀浆器中，用剪刀剪碎加适量的裂解液冰水中匀浆 1-4 min。匀浆结束后吸取溶液于 EP 管中保存备用。（含血液较多的组织可先用 PBS 清洗后再匀浆） 2） 细胞处理： A、 贴壁细胞处理：去掉培养基用 PBS 清洗后加入适量的裂解
llh刘丽华 各位好：我做了1个多月western blot了，内参跑得还可以，但是目的蛋白总是跑不好，今天跑出来非特异性条带很清楚，而目的条带却很淡，不知是什么原因！前一次也是这种情况，我就延长封闭时间至2h，一抗1:700，二抗1:5000，请各位高手帮忙分析一下吧！下面是我的图片，最下面，模糊的一条（靠图片中间的一条）是我的目的条带！ coffeeshine 如果非特异带很清楚，延长封闭时间没作用
xylish1 菜鸟一枚，目前要做HER-2（膜蛋白，185KD）western blot ，求教各位，一抗哪个公司的好？使用时抗体浓度，转膜时间及注意事项，多谢！ zhe992000 搭车求助，我想验证肿瘤组织中透明质酸（hyaluronan）的表达水平，这是一个糖蛋白，主要在细胞外基质中表达。在文献上一般是通过透明质酸合成酶的水平 或者透明质酸水解酶的水平来间接判断透明质酸的表达水平，我想直接测定透明质酸的表达量，不知
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