Qiagen-总RNA小提试剂盒（去除gDNA）

Qiagen-总RNA小提试剂盒（去除gDNA）

Qiagen-总RNA小提试剂盒（去除gDNA）将快速方便的RNA纯化步骤和有效去除基因组DNA污染整合在一起。使用该试剂盒能够从多种培养细胞和易裂解组织中纯化获得高纯度、高产量RNA。RNeasy Plus Mini Kit 一次能够纯化获得100 µg总RNA（>200 nt），并且高效去除基因组DNA。RNeasy Plus Micro Kit则适用于样本量较少的情况，可分离获得45 µg总RNA。该试剂盒可在QIAcube全自动核酸纯化仪上实现自动操作，可用RNAlater RNA Stabilization Reagent或Allprotect Tissue Reagent方便的稳定组织样本。

特点	参数
应用	Northern, dot, and slot blotting, end-point RT-PCR, quantitative, real-time RT-PCR, array analysis, next-generation sequencing/ RNA-Seq
洗脱体积	14 µl (micro kit), 30-50 µl (mini kit)
规格	Spin column
整合基因组DNA去除步骤	Yes
主要样本类型	Tissue, cells
处理	Manual (centrifugation) – automatable on QIAcube
纯化总RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白	Total RNA
样本量	5 x 10e5 cells or 5 mg tissue (micro kit), 10e7 cells or 30 mg (<700 µl) (mini kit)
技术	Silica technology
每次运行或制备时间	25 min
产量	Varies

性能

使用RNeasy Plus技术从细胞和组织中提取RNA，产物不含基因组DNA，产量高、可重复性好，适用于敏感的下游应用。从组织和培养细胞中提取的RNA完整性Agilent RIN数值接近10。

该试剂盒纯化产物不含短于200个核苷酸的RNA（如rRNA和tRNA），因此有富集mRNA的效果。如需从培养细胞中分离获得含有小RNA（如miRNA）的总RNA，我们提供专门的分离方案作为补充，请参见产品使用手册。

原理

细胞和易裂解组织首先在含有异硫酸胍的高变性Buffer RLT Plus中裂解和匀质化，能使RNases立即失活，以保证分离到完整的RNA。裂解液再流过gDNA Eliminator柱。该离心柱与高盐缓冲液共同作用，可选择性高效的去除基因组DNA。加入乙醇以提供RNA结合的合适条件，样本再加入到RNeasy离心柱。含有硅胶膜的特制离心柱能特异性的结合裂解细胞中的RNA。

对于多脂和难裂解组织，推荐使用RNeasy Plus Universal Kits。对于高通量的总RNA纯化，推荐使用RNeasy Plus 96 Kit。如需从其他类型样本中分离含有miRNA的总RNA，推荐使用miRNeasy Kits。

操作流程

RNeasy Plus Micro Kit能从多达5 x 10⁵个细胞或5 mg组织中分离总RNA，RNeasy Plus Mini Kit能够从10⁷个细胞或30 mg组织中分离总RNA。简洁的工作流程可在25分钟内纯化得到已去除基因组DNA的RNA。样本首先被裂解和匀质化。裂解液流过gDNA Eliminator柱，在流过gDNA Eliminator柱的溶液中加入乙醇，样本再上样到RNeasy离心柱。RNA结合到膜上，污染物被洗去。获得高品质RNA，RNeasy Plus Micro Kit的洗脱体积为14 µl，RNeasy Plus Mini Kit的洗脱体积为30 µl。

处理不同的起始样本可用不同的实验方案。实验方案的不同之处主要在于样本的裂解和匀质化。样本上样到gDNA Eliminator柱之后的步骤就类似。

使用Buffer RLT Plus（RNeasy Plus Micro Kit提供）进行组织破碎和匀质化时，可能会产生过多泡沫。在破碎和匀浆前向Buffer RLT Plus中加入Reagent DX（单独提供）可充分减少泡沫产生。Reagent DX经仔细检测，表明配合此试剂盒使用不会影响RNA的纯度或下游应用。

应用

RNeasy Plus Kit纯化得到的RNA适合对少量DNA污染敏感的下游应用，如定量real-time RT-PCR和RNA-Seq。纯化得到的RNA还可用于其他应用。

RNeasy Plus Micro Kit适用于小样本，包括：

激光显微切割冰冻切片

细针穿刺

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