NHDF细胞正常人皮肤纤维母细胞

细胞名称：NHDF细胞正常人皮肤纤维母细胞
生长特性：贴壁/悬浮
细胞来源：ATCC/DSMZ/RCB/SCIENCELL/中科院等
培养条件：1640+10%FBS
传代方法：1：2传代；3-4天一次
冻存条件：90%FBS+10%DMSO
支原体检测：阴性
使用范围：本细胞仅用于科研工作，未经许可不得用于其他目的
欢迎免费索取详细说明书，联系方式：18516582530 邓经理，微信同号 QQ 1738937820

NHDF细胞正常人皮肤纤维母细胞MTT步骤

1.吸走用于培养基，加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞；
2.吸干净PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，轻轻摇晃培养皿使胰酶浸没细胞表面，培养瓶放37度培养箱消化；
（细胞对于消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落，可以轻轻吹下时即可终止
，禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔，不要吹出大量气泡。）
3.加入6-8ml完全培养基终止消化，轻轻吹下细胞混匀； 
4.将混匀的细胞1000rpm（约150g）离心3min，弃上清，再用新鲜培养基重悬37度培养箱继续培养；
传代比例: 不同细胞生长速度不一，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用1:3-1:4传代，生长较慢的细胞可以1:2传代。

NHDF细胞正常人皮肤纤维母细胞注意事项
1.细胞经过运输后，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900-1000rpm(约150g)离
心3min，弃上清。加5ml PBS重悬细胞，再900-1000rpm(约150g)离心3min，用新鲜的完全培养基重悬接种到新的培养瓶。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时
碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。
2.细胞生长不均时，可以将细胞消化吹散后加入新的培养基重新接种或传代。
3.细胞生长缓慢时，可以选择提高血清浓度培养（最高不超过20%），也可以根据细胞生长状态，选择传代细胞到新的培养瓶中继续培养。
4.不同细胞贴壁性差异比较大，所以消化时间差别较大，20s-10min均有可能，具体以细胞消化到相互分离但未脱落，并可以轻轻吹下为准，严禁消化到细胞完全漂
浮。客户消化过度导致细胞死亡、漂浮、生长缓慢，不提供免费售后服务。

NHDF细胞正常人皮肤纤维母细胞增殖存活检测
1：接种细胞：用含10％胎小牛血清的培养液配成单个细胞悬液，以每孔 1000－10000个细胞的密度接种到96孔板中，每孔体积200ul.
2：培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3：呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul. 继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养
上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔的光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标来绘制细胞生长曲线。