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- 英文名:
MCF-7人乳腺癌细胞(Luc标记)
- 库存:
999
- 供应商:
上海圻明
- 细胞类型:
详见说明
- 组织来源:
详见说明
- 物种来源:
详见说明
- 细胞形态:
详见说明
- 运输方式:
常温/冷冻
- 生长状态:
详见说明
- 规格:
T/25*1瓶
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MCF-7人乳腺癌细胞(Luc标记)哪里买传代建议一传二
1)当细胞汇合度达到85%以上时,可进行传代。
2)在生物安全柜内,打开培养瓶瓶口,收集瓶内的培养基;
3)向培养瓶内加入3ml无菌的1×PBS 后,水平放置培养瓶,使PBS能够浸润到培养瓶底面上所有的面积,吸弃PBS;
4)向瓶内加入消化液1ml,浸润底面后放入37℃ CO2培养箱中孵育1~2min;
5)孵育完成后在倒置显微镜下观察细胞是否变圆飘起,若全部消化下来则直接向培养瓶内加入2ml含10%FBS的完全培养基中,将悬液吸入15ml离心管;
注:如还有部分细胞未消化下来,可采用分步消化:
① 准备一个无菌的15ml离心管,加入2ml含10%FBS的完全培养基;
② 将消化下来的细胞吸入①中的离心管内中和(避免吹打);
③ 向之前消化的培养瓶中加入1ml胰酶继续消化2min左右,轻拍培养瓶,95%左右细胞脱落后加入2ml含10%FBS的完全培养基中和,中和后的细胞悬液移入①中的离心管内。
6)1000rpm离心5min;
7)准备两个新的T-25培养瓶,各加入4ml完全培养基。
8)离心完成后,弃上清,用2ml完全培养基重悬离心细胞,将重悬后的细胞转入2个T-25培养瓶,每个培养瓶各1ml;
9)水平放置培养瓶,震荡混匀后,将培养瓶置于37℃,5%CO2培养箱中静置培养。

冻存 (细胞冻存建议每瓶T25冻一支)
1)~6)参照传代步骤
7)离心完成后,弃上清,用1mL冻存液重悬细胞沉淀,然后转入1.8ml冻存管中;
8)将冻存管转入填充满异丙醇的程序降温盒中,之后转入-80℃冰箱中过夜降温;
9)第二天,取出降温完成的序降温盒中的冻存管,尽快转入液氮罐中保存。

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我养的细胞都是乳腺癌细胞,以下几种:1、MCF-7 是一种很好养的人乳腺癌细胞,培养基用DMEM或RPMI1640均可, 10-15%的小牛血清就能长得很好。一般两到三天传一代。传代也很常规。吸出培养基,加入0.25%的胰酶1ml,轻轻晃动培养瓶,使胰酶流遍瓶壁,以去除残余的培养基。再加入2ml胰酶(25ml培养瓶)静置消化2-5min,待细胞缩起变圆,将胰酶吸出加入培养基3ml吹打成单细胞悬液分瓶即可。我一般都不用缓冲液冲洗,而直接用胰酶冲洗一下以去除剩余血清的作用,感觉效果还不错
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