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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系:
原代细胞
- 细胞类型:
见说明书
- 肿瘤类型:
见文献
- 供应商:
上海康朗生物科技有限公司
- 库存:
5×105
- 生长状态:
良好
- 年限:
永久
- 运输方式:
新鲜/干冰
- 器官来源:
生殖系统
- 是否是肿瘤细胞:
见文献
- 细胞形态:
正常
- 免疫类型:
见文献
- 物种来源:
大鼠
- 相关疾病:
见文献
- 组织来源:
生殖系统
- 规格:
5×105
细胞简介:
子宫是动物的雌性生殖器官的一部分,是动物胎儿或幼体发育生长的场所。子宫肌层比较厚,由成束或成片的平滑肌组成,肌束间以结缔组织分隔。子宫平滑肌具有收缩功能,收缩受激素的调节,其收缩活动有助于精子向输卵管运送、经血排出以及胎儿娩出。子宫平滑肌细胞的分裂增殖还受性腺激素的影响。
本公司生产的小鼠子宫平滑肌细胞采用酶解法制备而来,细胞总量约为5×105/T25方瓶,α-SMA、Desmin呈阳性,细胞纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基信息:
我们推荐使用康朗生物研制的小鼠子宫平滑肌细胞专用完全培养液(产品编号:KLM6069-5)作为体外培养小鼠子宫平滑肌细胞的培养基。
细胞培养过程中,传代是非常重要的环节,若操作不当会给细胞带来不可逆转的伤害,原代细胞因其培养难度高且传代次数有限,细胞消化的步骤需要格外细心与谨慎。康朗生物根据其丰富的原代细胞培养经验,总结出一套细胞消化的方法,有效降低了消化步骤对细胞的操作。现分享给大家:1. 当细胞达到80-90%融合时需要传代培养。
2. 提前准备好多聚赖氨酸(PLL,货号KL0403)或纤维粘连蛋白(BPF,货号KL8248)包被好的培养瓶。
3. 将完全培养基,胰酶/EDTA消化液(T/E,货号KL0103),胰胰中和液(TNS,货号KL0113)和不含钙镁离子的DPBS(货号KL0303)加热至室温。我们不推荐用37度水浴加热试剂和培养基。
4. 用DPBS冲洗细胞。
5. 以T-75培养瓶为例,向培养瓶中加入8mlDPBS,然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。轻轻摇动培养瓶保证细胞被胰酶/EDTA消化液完全覆盖。将培养瓶置于37度培养箱1-2分钟直到细胞变圆。在显微镜下观察细胞形态变化。
6. 在消化期间,准备一支50ml离心管加入5ml胎牛血清(FBS,货号KL0500)。
7. 将胰酶/EDTA消化液从培养瓶中吸出至50ml离心管中(一小部分细胞已消化下来),将培养瓶继续置于37度培养箱中1-2分钟(此时培养瓶中没有液体)。
8. 在孵化结束时,轻轻拍打培养瓶侧面使细胞脱离表面。在显微镜下检查以确保所有细胞已脱离。
9. 向培养瓶中加入5ml胰酶中和液,将消化后的细胞转移至50ml离心管中。再加入5ml胰酶中和液冲洗培养瓶,以保证所有细胞被收集。
10. 在显微镜下观察剩余细胞数量以确定是否收集成功,细胞数量应小于5%。
11. 以1000转/分离心收取的细胞悬液5分钟,然后在培养基中重悬细胞。
12. 细胞计数,然后将细胞以推荐的细胞密度接种在包被好的培养瓶中。
原代细胞、细胞系与细胞株的区别
与细胞系相反,原代细胞是非常敏感的细胞,需要传统培养基之外的额外营养物质。为了优化原代细胞的存活和生长,需要针对每种细胞类型选择特定的培养基。例如,内皮细胞对营养的需求与上皮细胞或神经元有很大区别,因此需要特制的内皮细胞培养基。而传统的细胞培养基依靠血清提供生长因子、激素、脂质和其他的未知组分,以支持细胞的生长。但对于原代细胞,高血清水平可导致细胞分化,或促进污染细胞如成纤维细胞的生长。
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