Cre 重组酶

特别提示：包括Cre 重组酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Cre 重组酶
英文名称：Cre recombinant enzyme

产品货号：Cre 重组酶
产品规格：250U|250U|50U

特性:
两个 loxP 位点之间 DNA 的切割
含 loxP 位点 DNA 分子的融合
loxP 位点之间 DNA 序列的翻转
概述:
Cre 重组酶是细菌噬菌体 P1 的 I 型拓扑异构酶，催化 loxP 位点间的 DNA 进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子，Cre 介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡。loxP 识别一个 34 bp 序列，其两端是两个 13 bp 的反向重复序列，中间是起定向作用的 8 bp 间隔区。重组产物根据 loxP 位点的位置和相对方向而不同，两个含单 loxP 位点的 DNA 将被融合。两个正向重复 loxP 位点间的 DNA 将以环状形式切割，而两个反向 loxP 位点间的 DNA 序列将被翻转。
来源:
纯化自重组 E. coli 菌株，其携带有编码细菌噬菌体 P1 的 Cre 重组酶的质粒，酶的 N 端添加了丙氨酸和甘氨酸残基。
反应条件:
1X Cre 重组酶反应缓冲液
[33 mM NaCl，50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM MgCl2]，37℃ 温育。
热失活:70℃ 加热 10 分钟。
单位定义:
1 单位指在 50 μl 反应体系，37℃ 条件下，30 分钟使 0.25 μg 的 pLox2+ 对照 DNA 产生最大位点特异性重组所要的酶量。最大重组可以通过琼脂糖凝胶电泳分析或通过反应物转化后进行氨苄抗性平板筛选。
浓度:
1,000 units/ml。
注意事项:
建议进行琼脂糖凝胶电泳前，将 Cre 重组酶反应混合物于 70℃ 温育 10 分钟。
由于 Cre 重组酶反应是一个动态平衡过程，用 loxP2+ 对照底物仅有 20-30%发生重组。由于重组产物的量较少，故溴化乙锭染色后呈现微弱条带，同时伴有底物染色强度相应减弱。
延长温育时间不会提高重组效率，反而还可能导致大分子量重组产物的生成。
反应中增加 Cre 重组酶量将形成 loxP 依赖性 Cre-DNA 复合物，从而抑制重组反应。
对照 DNA:
线性化 pLox2+ 长 3,625 bp，距两端 400 bp 处各有一 loxP 位点。两 loxP 位点之间有一复制原点和一个氨苄青霉素抗性基因。loxP 位点之间的重组产生一个环状（2,787 bp）的氨苄青霉素抗性质粒（0.8% 琼脂糖凝胶电泳约 1.7 kb 大小）和一个 838 bp 长的 DNA 片段。

除了Cre 重组酶,，我公司还供应以下相关产品：



名称：T4聚核苷酸激酶
货号：BTN120506
规格：250U
T4聚核苷酸激酶能够催化ATP的γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的5′-羟基末端以及3′-单磷酸核苷上。本产品还具有3′磷酸酶活性，将3′-磷酸基团从寡核苷酸的3′磷酸末端、脱氧3′-单磷酸核苷和脱氧3′-二磷酸核苷上水解掉。其反应示意图如下：


产品用途：
1．DNA或RNA的末端标记，用作寡核苷酸探针和进行DNA测序。
2．寡核苷酸5′末端的磷酸化，以便进行连接反应。
3．除去3′磷酸基团。

产品组成：

成分	规格
T4聚核苷酸激酶，10U/μL	25μl
10×反应缓冲液	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1 单位指在37℃条件下，30分钟内催化 1nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量。

1×反应缓冲液：[70mM Tris-HCl(pH7.6@25℃)，10mM MgCl2，5mM DTT]，37℃温育。

热失活：65℃加热20分钟。

来源：重组E.coli菌株，克隆有T4多聚核苷酸激酶或修饰的T4多聚核苷酸激酶基因。

自备试剂：0.5M EDTA(pH8.0)、[γ-32P或γ-33P]-ATP或0.1mM ATP、DNA纯化试剂盒。

使用方法：

一、DNA 5′末端标记：
1．参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA	1～50 pmol(5′末端)
10×反应缓冲液	5μL
自备的[γ-32P或γ-33P]-ATP(3000Ci/mmol)	50pmol
补充无核酸酶的去离子水	至48μL
T4聚核苷酸激酶,10U/μL	2μL

2．按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
3．37℃孵育30分钟。
4．加入自备的1μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
5．后续可以使用酚氯*(代"仿")抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒可以向我公司订购。

二、DNA 5′末端磷酸化：
1．参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA	1～50 pmol(5′末端)
10×反应缓冲液	5μL
自备的0.1mM ATP	3μL
补充无核酸酶的去离子水	至48μL
T4聚核苷酸激酶，10U/μL	2μL

2．按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
3．37℃孵育30分钟。
4．加入自备的1μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
5．后续可以使用酚氯*(代"仿")抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。