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- 详细信息
- 询价记录
- 文献和实验
- 技术资料
- 品系:
原代细胞
- 细胞类型:
见说明书
- 肿瘤类型:
见文献
- 供应商:
上海康朗生物科技有限公司
- 库存:
5×105
- 生长状态:
良好
- 年限:
永久
- 运输方式:
新鲜/干冰
- 器官来源:
呼吸系统
- 是否是肿瘤细胞:
见文献
- 细胞形态:
正常
- 免疫类型:
见文献
- 物种来源:
人
- 相关疾病:
见文献
- 组织来源:
呼吸系统
- 规格:
5×105
细胞简介:
肺泡巨噬细胞由单核细胞分化而来,广泛分布在肺间质内,在肺泡隔内较多。肺泡巨噬细胞的吞噬、免疫和分泌作用都十分活跃,有重要防御功能。吸入空气中的尘粒、细菌等异物进入肺泡,多被肺泡巨噬细胞吞噬清除,故细胞胞质内常见尘粒、细菌等物进入肺泡,多被肺泡巨噬细胞吞噬清除,故细胞胞质内常见尘粒、次级溶酶体及吞噬体等。吞噬异物的肺泡巨噬细胞,有的从肺泡腔经呼吸道粘液流动和纤毛运动而被咳出,有的进入肺淋巴管随淋巴进入肺淋巴结内。
本公司生产的人肺泡巨噬细胞采用体外灌注法制备而来,细胞总量约为5×105/T25方瓶,CD68呈阳性,细胞纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养基信息:
我们推荐使用康朗生物研制的人肺泡巨噬细胞专用完全培养液(产品编号:KLH4044-5)作为体外培养人肺泡巨噬细胞的培养基。
细胞培养过程中,传代是非常重要的环节,若操作不当会给细胞带来不可逆转的伤害,原代细胞因其培养难度高且传代次数有限,细胞消化的步骤需要格外细心与谨慎。康朗生物根据其丰富的原代细胞培养经验,总结出一套细胞消化的方法,有效降低了消化步骤对细胞的操作。现分享给大家:1. 当细胞达到80-90%融合时需要传代培养。
2. 提前准备好多聚赖氨酸(PLL,货号KL0403)或纤维粘连蛋白(BPF,货号KL8248)包被好的培养瓶。
3. 将完全培养基,胰酶/EDTA消化液(T/E,货号KL0103),胰胰中和液(TNS,货号KL0113)和不含钙镁离子的DPBS(货号KL0303)加热至室温。我们不推荐用37度水浴加热试剂和培养基。
4. 用DPBS冲洗细胞。
5. 以T-75培养瓶为例,向培养瓶中加入8mlDPBS,然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。轻轻摇动培养瓶保证细胞被胰酶/EDTA消化液完全覆盖。将培养瓶置于37度培养箱1-2分钟直到细胞变圆。在显微镜下观察细胞形态变化。
6. 在消化期间,准备一支50ml离心管加入5ml胎牛血清(FBS,货号KL0500)。
7. 将胰酶/EDTA消化液从培养瓶中吸出至50ml离心管中(一小部分细胞已消化下来),将培养瓶继续置于37度培养箱中1-2分钟(此时培养瓶中没有液体)。
8. 在孵化结束时,轻轻拍打培养瓶侧面使细胞脱离表面。在显微镜下检查以确保所有细胞已脱离。
9. 向培养瓶中加入5ml胰酶中和液,将消化后的细胞转移至50ml离心管中。再加入5ml胰酶中和液冲洗培养瓶,以保证所有细胞被收集。
10. 在显微镜下观察剩余细胞数量以确定是否收集成功,细胞数量应小于5%。
11. 以1000转/分离心收取的细胞悬液5分钟,然后在培养基中重悬细胞。
12. 细胞计数,然后将细胞以推荐的细胞密度接种在包被好的培养瓶中。
原代细胞、细胞系与细胞株的区别
与细胞系相反,原代细胞是非常敏感的细胞,需要传统培养基之外的额外营养物质。为了优化原代细胞的存活和生长,需要针对每种细胞类型选择特定的培养基。例如,内皮细胞对营养的需求与上皮细胞或神经元有很大区别,因此需要特制的内皮细胞培养基。而传统的细胞培养基依靠血清提供生长因子、激素、脂质和其他的未知组分,以支持细胞的生长。但对于原代细胞,高血清水平可导致细胞分化,或促进污染细胞如成纤维细胞的生长。
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文献和实验1、细胞培养所用溶液及其配制 1×RPMI1640及:按照产品说明配制,过滤除菌,4℃保存备用。 新生牛血清:56℃灭活30min,-20℃保存备用。 2×104U/ml青、链霉素液(双抗):青链霉素各2×106 U溶于100ml灭菌双蒸水中,过滤除菌,分装,-20℃保存备用。 10×Na2EDTA-胰酶溶液(2.5%):Na2EDTA 0.2g,NaCl 8.0g,KCl 0.2g ,Na2HPO4.12H2O 2.89g,KH2PO
实验材料: 1. 肺泡巨噬细胞来源:体重为2—3kg的成年兔。也可使用成年大鼠; 2. 灌洗液:不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.4; 3. 培养液:MEM培养液,添加谷氨酰胺1mmol/L、卡那霉素100µg/ml、青霉素200IU/ml、链霉素200µg/ml、HEPES 10mmol/L和10%胎牛血清; 4. 无菌手术器械:手术刀、解剖剪、解剖镊、止血
浙江大学柯越海课题组发文解析去磷酸化修饰调控细胞外囊泡的作用机制
了该过程的调控,Shp2 信号是其中一个关键途径。 同时,研究结合基因修饰动物模型进一步显示抑制肺泡上皮 Shp2 缺失可促进多囊泡形成,在炎症条件下介导肺泡巨噬细胞活化,提示了炎症环境下肺泡上皮细胞与巨噬细胞的相互作用的新途径,为理解肺损伤与炎症微环境的调控机制提供新的线索。 浙江大学基础医学院博士生张越飞、李仪青为论文第一作者,柯越海、张雪为论文的共同通讯作者。该研究受到了国家自然科学基金重点项目,科技部重点研发计划等资助。
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