DNA 聚合酶 I，（Klenow）大片段

特别提示：包括DNA 聚合酶 I，（Klenow）大片段在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：DNA 聚合酶 I，（Klenow）大片段
产品货号：SV0961
产品规格：1KU|1KU|200U|100U

特性:
用随机引物制备探针
切除 3´ 突出端或补平 5´ 突出端，形成平末端
cDNA 第二条链的合成
概述:
DNA 聚合酶 I，大片段（Klenow 片段）是 E. coli DNA 聚合酶 I 的蛋白水解产物，具有 DNA 聚合酶活性和 3´→5´ 核酸外切酶活性，但缺失了 5´→3´ 核酸外切酶活性。Klenow 既保留了全酶的高保真性，又不会降解 DNA 5´ 末端。
来源:
重组 E. coli 菌株，携带有 E. coli polA 基因，该基因去除了 5´→3´ 核酸外切酶结构域。
浓度:
5,000 和 50,000 units/ml。
热失活:
75℃ 20 分钟。
使用注意事项:
由于该酶具有 3´→5´ 核酸外切酶活性，升高反应温度、加入过量的酶、未加入 dNTP 或反应时间过长均会导致 DNA 末端碱基被切除形成凹陷。

除了DNA 聚合酶 I，（Klenow）大片段,，我公司还供应以下相关产品：



名称：T3 RNA聚合酶
货号：BTN120309
规格：1000U
本酶是噬菌体T3 DNA编码的酶，对T3启动子序列具有高度特异性，不能识别其它生物来源的启动子。本酶是依赖于DNA的RNA聚合酶，具有 5′→3′的RNA聚合酶活性，以含有T3启动子序列的双链DNA为模板，以NTP为底物，合成与启动子下游的单链DNA互补的RNA。

产品用途：
1．为Northern杂交以及Southern杂交制作高标记探针。
2．制作 RNA 剪接反应的前体。
3．以帽类似物为引物，制作Capped mRNA。

产品组成：

成份	规格
T3 RNA聚合酶	50μL(20U/μL)
5×转录缓冲液	0.25mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1个活性单位是指在37℃、60分钟内将1nmol的AMP合成掺入到寡聚核苷酸片段(DE-81光吸收形式)所需的酶量。

名称：末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)
货号：YT512
规格：500U
本酶是一种模板依赖的DNA聚合酶，可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3"羟基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的zuì短长度为3个核苷酸。

用途：寡核苷酸或DNA 3"羟基末端标记；DNA末端加尾(DNA tailing)；5"-RACE；合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为小牛胸腺。
活性定义：37℃60分钟内，催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3"羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：200mM potassium cacodylate(pH7.2),1mM CoCl2,0.1mM DTT,0.01%(v/v)Triton X-100,10μM oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNase。
酶储存溶液：100mM KAc(pH6.8),2mM 2-mercaptoethanol,0.01%(v/v)Triton X-100 and 50%(v/v)glycerol 。
Reaction Buffer(5X)：0.125M Tris(pH7.2 at 25℃),1M potassium cacodylate,0.05%(v/v)Triton X-100,5mM CoCl2。
失活或抑制：70℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Terminal Deoxynucleotidyl Transferase失活。金属离子螯合剂，较高浓度的铵根离子、氯离子、碘离子和磷酸根均对Terminal Deoxynucleotidyl Transferase有抑制作用。
储存条件：-20℃。

使用说明：

1. DNA 3’末端标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
待标记DNA————————————————————10 pmol of 3"-termini
Reaction Buffer (5X) ——————————————10µl
[α-32P]-ddATP, ~10TBq/mmol (3000Ci/mmol)————1.85 MBq (50µCi)
TdT (20U/µl) ——————————————————2µl
补充无核酸酶的去离子水 —————————————至50µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在zuì低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5µl 0.5M EDTA终止反应。
说明：标记的效率和3’羟基末端的类型有关，3’突出末端的标记效率要显著高于3’缩进末端或平末端的标记效率。

2. DNA末端加尾(DNA Tailing)：
a. 参考下表格设置反应体系：
DNA片段 ————————————————————1 pmol of 3"-termini
Reaction Buffer (5X)——————————————4µl
dATP or dTTP——————————————————130pmol
或 dGTP or dCTP (四种中通常只需加入一种)————60pmol
TdT (20U/µl)——————————————————1.5µl
补充无核酸酶的去离子水—————————————至20µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在zuì低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5µl 0.5M EDTA终止反应。
说明：在上述反应条件下，每个3’羟基末端可以加上100-130个dA或dT，或20-30个dC或dG。

3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。