Y187酵母感受态细胞

特别提示：包括Y187酵母感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Y187酵母感受态细胞
英文名称：Y187 Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0066
产品规格：10×100μl/50×100μl

Y187菌株是GAL4系统酵母单杂，双杂实验用菌株，MATα型，可直接转化质粒或与MATa型酵母菌株(Y2HGold，AH109等)通过mating操作进行筛库试验。
Transformation marker为：trp1，leu2，报告基因为：lacZ，MEL1。
Y187-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。
质粒PGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD(来自酵母转录因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)与目标蛋白(Bait)的融合蛋白；
质粒PGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD(GAL4 C端768 ~881位氨基酸)与目标蛋白(Prey)的融合蛋白。
GAL4系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N端1 ~174位氨基酸区段的DNA结合域(DNA-BD)和位于C端768 ~881位氨基酸区段的转录激活域(AD)。
DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。
BD和AD单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD融合，形成bait融合蛋白(bait-BD)和prey融合蛋白(prey-AD)，如果bait和prey发生相互作用，就会促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。
Y187有两个报告基因：lacZ，MEL1，分别由两种不同的启动子(G1，M1)启动，这两种启动子只有GAL4识别的17bp核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。Y187感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，经PGADT7质粒检测转化效率>104cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃
基因型：
MATα，ura3-52，his3-200，ade 2-101，trp 1-901，leu 2-3，112，gal4Δ，met–，gal80Δ，URA3：:GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ，MEL1
操作说明：
1.取100 μl冰上融化的Y187感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒2-5μg，Carrier DNA(95-100度5min,快速冰浴，重复一次)10 μl，PEG/LiAc 500μl并吸打几次混匀，30度水浴30分钟(15 min时翻转6-8次混匀)。
2.将管放42度水浴15min(7.5 min时翻转6-8次混匀)。
3.5000 rpm离心40s弃上清，ddH2O 400μl重悬，离心30s弃上清。
4.ddH2O 50μl重悬，涂板,29℃培养48-96h。
注意事项：
1.感受态细胞zuì好在冰上融化。
2.转化高浓度的质粒可相应减少zuì终用于涂板的菌量。
3.同时转化2-3种质粒时可增加质粒的用量。
4.Y2HGold酵母菌株对高温敏感，zuì适生长温度为27-30℃；高于31℃，生长速度和转化效率呈指数下降。
5.菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的Adenine被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成Adenine以供利用，然而，有些菌株的ADE2基因被破坏，Adenine合成途径受阻；又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常，所以造成中间产物P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
6.酵母在缺陷培养基中生长速度比YPDA培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂板为例：涂YPDA平板29℃，48h培养可见直径1mm克隆；涂SD单缺平板29℃，48-60h培养可见直径1mm克隆，涂SD双缺平板29℃，60-80h培养可见直径1mm克隆，涂SD三缺或四缺平板平板29℃，80-90h培养可见直径1mm克隆。

除了Y187酵母感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：



名称：单细胞裂解液(DNA提取)
货号：BTN130803
规格：1mL
本产品为单细胞DNA提取专用裂解液，本裂解液经多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸结构的稳定。纯化所得DNA可用于全基因组扩增(WGA)等实验。本产品足够使用200次以上。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

名称：Oligo快速复性液
货号：BTN130204
规格：1mL
本产品是精心优化的、专门用于Oligo快速复性的试剂，广泛用于以单链Oligo为材料制备Adaptor、Linker和其他双链Oligo分子，跟各种后续的分子生物学实验兼容，包括文库构建、抑制性差减杂交、AFLP等。本产品即可用于DNA-DNA Oligo复性，也适用于RNA-RNA Oligo和DNA-RNAOligo复性。还适用于带修饰碱基的Oligo的复性。

储存条件：低温运输、-20℃避光保存、有效期一年。

名称：地塞米松
货号：BTN131234
规格：1mL
本产品为浓度为50mg/mL的地塞米松乙醇溶液。地塞米松(Acidocont,Deronil,Dexacortal,dexametona)又名氟美松、氟甲强地松龙、德沙美松。分子式：C22H29FO5，分子量：392.5，CAS号：50-02-2。溶于乙醇。地塞米松属于糖皮质类激素，具有抗炎、抗过敏、抗风湿、免疫抑制等作用。

储存条件：低温运输，-20℃避光保存，有效期6个月。

名称：感受态细胞快速制备试剂盒
货号：YT022
规格：200次
本试剂盒是一种用于大肠杆菌感受态细菌快速制备的试剂盒。一步法感受态细菌制备试剂盒是在经典的TSS法的基础上进行适当改良而成，既继承了TSS法的快速和简便，又在此基础上提高了感受态细菌的转化效率和易操作性。使用本试剂盒可以使感受态效率达到106以上。不仅可以转化质粒，而且可以转化普通的连接产物。另外，对细菌的培养条件要求比较宽松，培养的细菌只要处于对数期内就可以使用本试剂盒制备感受态细菌。

使用本试剂盒操作非常简单，细菌培养好后仅需十几分钟就可以完成感受态细菌的制备。本试剂盒适用于绝大部分常见的大肠杆菌，包括DH5α、JM109、TG1、HB101和XL-1等。对于一些用于蛋白表达或病毒质粒构建的特殊大肠杆菌也适用，制备出来的感受态菌转化质粒肯定没有问题，但如果转化连接产物有时效果不如DH5α等其它常见的细菌。本试剂盒提供了DH5α甘油菌作为菌种，可以用于制备感受态细菌。本试剂盒可以分多次使用，共可以制备足够进行200-400次转化的感受态细菌。

注意事项：
1. 需自行配制LB液体培养基和LB平板以用于细菌的培养和感受态效率的检测。
2. 尽管经过我们的测试凡是处于对数期内的细菌都可以用于感受态细菌的制备，但如果细菌生长的OD600的值达到0.3-0.5左右时，制备出来的感受态效果zuì佳。
3. 在制备感受态细菌的过程中均使用不含抗生素的LB。在使用感受态菌的过程中热休克后的37℃培养时也必须使用无抗生素的LB，即便转入的质粒是有抗性的。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒
货号：SY0283
规格：20T
本试剂盒是利用拓扑异构酶（Topoisomerase）高效快速连接DNA片段的原理进一步研发而成，与传统的T4连接酶相比，具有以下优势：
1）快速，仅需1-5分钟即可完成连接反应。
2）高效，无自连现象，阳性克隆率接近100%，无需设置蓝白斑筛选；
3）操作简单，从连接到涂板仅需15-20min。操作过程省去冰浴、热激和1h复苏。
4）可连接长达10kb目的产物。

产品用途：平末端PCR产物的快速克隆。克隆后PCR产物的快速测序【使用M13F/M13R引物】。

产品组份：
pESI-Blunt vector 30ng/µl)————20µl
1kb control insert(40ng/µl)————5µl
10×Enhancer————————20µl

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期12个月。

名称：农杆菌EHA101菌种
货号：BTN12-285
规格：1mL