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- 2025年07月15日
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- 细胞类型：
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- 供应商：
上海博湖
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31
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- 生长状态：
贴壁/悬浮
- 年限：
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- 运输方式：
常温运输/干冰运输
- 器官来源：
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- 是否是肿瘤细胞：
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- 细胞形态：
上皮样/成纤维样/其它
- 免疫类型：
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- 物种来源：
人/小鼠/大鼠/其他
- 相关疾病：
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- 组织来源：
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细胞描述
小鼠肾足突细胞培养试剂盒肾是脊椎动物的一种器官，属于泌尿系统的一部分，负责过滤血液中的杂质、维持体液和电解质的平衡，最后产生尿液经由后续管道排出体外；同时也具备内分泌的功能以调节血压。在人体中，正常成人具备两枚肾脏，位于腰部两侧后方。其中，小鼠肾足突细胞传5代以上仍可以保持原代细胞的分化状态，进而可以用于评估体外药物模型系统和调节特定基因的遗传功能。 虽然肾足突组织机械韧性很强，但利用本公司试剂盒中提供的肾足突组织分离体系来分离，EDTA/EGTA处理过的薄的肾足突组织片能使得肾足突组织中细胞的一些功能特性发生改变，从而将肾足突细胞分离开来。本试剂盒适用于分离培养小鼠肾足突细胞。本体系提供了最佳的组织分离条件，分离单个细胞的效率是已出版文献中所报道的5~6倍。此外，本体系还能保证所分离的细胞在培养基中具有很高的活性。利用的成纤维抑制体系，可以最大程度地降低所培养的肾足突原代细胞中成纤维细胞的含量。 小鼠肾足突细胞培养试剂盒适合于培养小鼠的肾足突细胞。本试剂盒包含： （1）OptiTDSTM小鼠肾足突细胞组织解离液(3×1ml) （2）小鼠肾足突细胞组织处理缓冲液(100ml) （3）FibrOutTM小鼠肾足突细胞成纤维抑制剂 (1ml（500x）) （4）小鼠肾足突细胞组织洗液(5 x 100 ml) （5）小鼠肾足突细胞生长因子（1ml500x）及血清（5x10ml） （6）小鼠肾足突细胞基础培养基(5 x 100ml) （7小鼠肾足突组织预备液 (1 x 100 ml) （8）小鼠肾足突细胞培养试剂盒使用说明书
细胞传代：
小鼠肾足突细胞培养试剂盒1. 显微镜下观察细胞，神经干细胞悬浮成“神经球”生长，通常情况下，每两天换液一次，每四天传代一次。
2. 在生物安全柜或者超净台中，将培养瓶中的含有神经球的培养基转移到15ml离心管中。
3. 500rpm离心5分钟，收集神经干细胞。
4. 加入1ml 0.125%含有EDTA的胰酶，在超净工作台中轻轻吹打10次，注意不要消化太久，消化的目的是缩小神经球的体积，不要消化能单个神经干细胞，那样会影响其生长速度。
5. 然后加入5ml培养基，吹打均匀后1000rpm 离心5分钟。
6. 离心后，去掉上清，用新鲜培养基重悬细胞，按照1:2-1:3的比例进行细胞传代培养。
细胞复苏：
1. 小鼠肾足突细胞培养试剂盒 取出冻存管后，投入37℃水浴中，震荡解冻2 min。
2. 酒精消毒管壁外侧后，将其转入超净台中，将管内细胞转移至离心管中，加入5 ml 37℃预热的DMEM/F12+10%FBS培养基。
3. 将离心管离心（1000rpm，5 min）。
4. 弃去上清，再加入2ml DMEM/F12+1%N2+2%B27完全培养基，转入培养瓶中培养。
细胞冻存：液氮冻存（冻存液：DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO）。
细胞运输：干冰运输（冻存管）/ 常温运输（T-25培养瓶）
细胞鉴定：神经干细胞采用nestin免疫荧光染色鉴定。左图是白光视野中的“神经球”形态，放大倍数为200x，右图为nestin染色后的荧光图片（绿色），放大倍数为200x。
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小鼠肾足突细胞培养试剂盒悬浮细胞的传代
悬浮细胞传代比贴壁细胞传代稍微简单一些。由于细胞已经在生长培养基中悬浮，因此无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离，整个过程较为迅速，对细胞的损伤也较小。悬浮培养时不进行生长培养基的更换；而是每 2 到 3 天加料一次，直到细胞汇合。可以直接在培养瓶中稀释细胞，然后继续培养扩增，或者也可以从培养瓶中取出一部分细胞，将余下的细胞稀释到该细胞系适宜的接种密度。悬浮细胞传代后的延滞期一般比贴壁细胞短。
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文献和实验实验材料： 1. 肾组织：取自8周龄健康雌性小鼠； 2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2； 3. 0.1%明胶：为生长基质成分，在取材前先用它包被培养瓶的生长面； 4. 消化液：0.1%胰蛋白酶溶液； 5. 培养液：DMEM培养液，补充20%的胎牛血清、成纤维细胞生长因子（α-FGF）2µg/ml、庆大霉素100µg/ml、青霉素100IU/ml、链霉素100µg/ml； 6. 用于细胞
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